Что это такое?
Проточная цитометрия — способ исследования качества и количества клеток, которые по одной штуке проходят через узкий капилляр. Для этого клетки помечаются флюоресцентными антителами или антигенами. Оборудование для такого исследования называется цитометром.
Цитометрия называется «проточной», потому что клетки исследуются в протоке. Благодаря микрокапиллярной системе клетку можно выделить и изучить отдельно.
Принципы метода проточной цитометрии
Клеточную суспензию метят флуоресцентными красителями, после чего вместе с потоком жидкости пропускают через проточную ячейку. Клетки вынуждены «выстраиваться» друг за другом, благодаря чему становится возможным брать исследовать конкретную.
После отделения клетка облучается лазером, а затем сигналы рассеивания/свечения регистрируются на специальном аппарате.
Размер клетки определяется за счёт рассеивания света под углом до 10°, размеры ядра и цитоплазмы — за счёт рассеивания под углом до 90°. Также учитывается интенсивность флуоресцентного свечения по 30 каналам. Глядя на эти показатели, лаборант определяет, из чего состоит клетка.
Преимущества проточной цитометрии крови и других тканей организма
- Возможность анализировать большое число клеток за один подход — вплоть до 108 шт. в мл.
- Высокая скорость работы, как следствие — экономия времени. Методом проточной цитометрии можно воспроизводить до 100 000 событий в секунду.
- Возможность определять субпопуляции, а также измерять параметры тех клеток, которые редко встречаются.
- И наконец, лаборант может изменять интенсивность свечения.
Применение проточной цитометрии
Сегодня это очень востребованный метод клеточного анализа. Он применяется для изучения аспирата костного мозга, крови, ликвора, асцитической, плевральной, суставной жидкостей, тканей (особенно опухолевых), а также суспензии микрочастиц. Применение проточной цитометрии даёт возможность диагностировать онкологические заболевания, позволяет наблюдать за пациентами, находящимися в группе риска, оценивать состояние иммунной системы, выявлять специфические маркёры.
В целом, метод проточной цитометрии используется в разных направлениях медицины, фармакологии и даже сельского хозяйства. Например:
- Иммунология: обнаружение фагоцитарной активности, внутриклеточных белков, оценка клеточного цикла и цитотоксичности, иммунофенотипирование и т. д.
- Цитология: исследование клеточного цикла, экспрессии антигенов, определение принадлежности клеток и активности ферментов.
- Гематология: диагностика лейкозов, резидуальной болезни, лимфопролиферативных болезней, реактивных лимфоцитозов, а также анализ состава клетки, количества ретикулоцитов, тромбоцитов и т. д.
- Фармакология: определение экспрессии маркёров, активности ферментов, стадий клеточного цикла.
- Сельское хозяйство: анализ плоидности клеток, цикла, протопластов, а также «сексинг» семенного материала с/х-животных.
Метод успешно используется в трансплантологии и микробиологии. Есть заболевания, при которых цитометрия не рекомендуется: это лимфома Ходжкина, миелодиспластический синдром и миелобластный лейкоз. Вместе с тем, с помощью данной методики врачи могут мониторить терапию и отслеживать состояние пациентов с указанными заболеваниями.
Проточная цитометрия также показала себя эффективной и полезной при беременности.
Источник: labinstruments.ru
