Липаза биохимия

Сложная пища, поступающая в наш организм, не может быть принята пищеварительной системой в чистом виде. Предварительно ее необходимо расщепить на более мелкие составляющие. Этим занимаются ферменты: амилаза, липаза, протеаза, которые естественным образом вырабатываются тканями. Если их производство недостаточно, врач может назначить дополнительный прием курса ферментов. По уровню натуральных ферментов в крови иногда можно сделать предварительную оценку некоторых органов, например, поджелудочной железы.

Если липаза повышена в крови, причины могут скрываться в заболеваниях различной степени тяжести, протекающих в организме. Но прежде, чем в диагностической форме перечислять причины повышения или понижения липазы, стоит разобрать, что это вообще такое, каковы функции и нормы липазы у человека.

к оглавлению ↑

Что такое липаза?

Это пищеварительный фермент, относящийся к классу гидролаз. Вероятно, такое определение вам мало что объяснило. Объясняя проще, липаза – это белковое соединение, которое вырабатывается в нескольких участках нашего организма для того, чтобы играть роль в ряде процессов, среди которых:

• Расщепление и фракционирование жиров. Это основная их функция;
• Участие в получении энергии организмом;
• Участие в усвоении некоторых витаминов и жирных кислот;

Откуда берется липаза?

В зависимости от того, в каких тканях производится липаза, она немного отличается по функциям, хотя основная их роль – расщепление жиров остается неизменной. Липаза вырабатывается:

1. Поджелудочной железой

Это так называемая панкреатическая липаза, в норме в крови ее находится наибольшее количество по сравнению с другими видами.

2. Легкими;
3. Ротовой полостью младенцев.

В этом случае говорят о лингвальной липазе, ее основная роль – помогать расщеплять жиры, поступающие с материнским молоком.

4. Печенью;

Такая липаза регулирует уровень липидов в плазме, а также без нее невозможно усвоение некоторых соединений (например, хиломикронов).

5. Кишечником;
6. Желудком

Здесь липаза дополнительно стимулирует деструкцию трибутирина масла с получением более усваиваемых веществ.

Считается, что наибольшее значение имеет панкреатическая липаза. По ее уровню можно предположить наличие панкреатита, его форму и осложнения.

Тем не менее, отталкиваясь только от количества липазы поджелудочной железы, делать вывод о наличии или отсутствии некоторых заболеваний преждевременно. Необходимо комплексное обследование пациента. Дополнительно может быть назначен анализ на амилазу (фермент, расщепляющий крахмал), который также играет значимую роль, когда речь заходит о заболеваниях поджелудочной железы. Более подробные особенности такого фермента, как амилаза, были рассмотрены в другой нашей статье.

к оглавлению ↑

Норма в крови

Если речь идет об отклонениях в большую и меньшую сторону, существует численное значение количества липазы, принятое за норму.

До 18 лет в 1 мл крови допустимо иметь 0-130 единиц липазы, для людей старшего возраста этот интервал расширяется до 190 единиц.

Норма липазы в крови у женщин не отличается от показателя, характерного для мужчин.

По сравнению с амилазой крови, липаза может оставаться нормальной при некоторых заболеваниях печени, внематочной беременности и других опасных состояниях, что относит анализ на липазу к специфическим.

к оглавлению ↑

Липаза повышена в крови

Для врача это ценная диагностическая информация, по которой можно предположить дальнейшее обследование или назначение лечения. Заболевания, при которых увеличивается уровень этого фермента в крови, могут быть следующими:

• Острый панкреатит;
• Холецистит;
• Эндокринные заболевания;
• Холестаз;
• Эпидемический паротит;
• Инфаркт;
• Ожирение;
• Онкологии поджелудочной железы;
• Подагра;
• Кишечная непроходимость;
• Язва желудка или других тканей;
• Прием ряда медицинских препаратов;

Стоит также указать, что повышение липазы в крови сопровождает травмы и переломы.

Развитие панкреатита происходит не сразу, активность липазы можно выявить только на третий день, при этом в первый и во второй дни липаза повышена незначительно. Существуют дополнительные нюансы диагностики панкреатических заболеваний. Например, при жировом панкреонекрозе липаза крови будет в норме, а при остром панкреатите она возрастает более чем в три раза. Острый панкреатит развивается стремительно, и липаза начинает резко увеличиваться уже спустя 2-5 часов после поражения железы.

к оглавлению ↑

Липаза понижена в крови

Другой вариант отклонения липазы от нормы – это его уменьшение. Низкий уровень этого фермента в крови может указывать на одно из следующих состояний:

1. Раковая опухоль любой локализации, кроме самой поджелудочной железы.
2. Неправильное питание с избытком жирной кухни.
3. Наследственная особенность: высокий уровень липидов в крови.
4. Переход острого панкреатита в хроническую стадию.
5. Удаление поджелудочной железы.
6. Кистозный фиброз.
7. Наследственная гиперлипидемия.

к оглавлению ↑

Подготовка к анализу на ферменты

Перед тем, как сдать крови на анализ липазы, необходимо за сутки отказаться от жирной, острой и слишком пряной пищи. Анализ сдается с утра на голодный желудок.

Сегодня распространен ферментативный метод определения липазы, но имеет место и иммунохимический. Они различаются механизмом и требованиями к медицинскому персоналу.

В редких случаях анализ на липазу проводится не в описанных выше условиях, без предварительной минимальной подготовки пациента. Это делают, если необходим срочный результат.

Если у вас по-прежнему остались вопросы о том, что такое липаза в биохимическом анализе крови, оставляйте их в комментариях.

Будьте здоровы!

Источник: vseproanalizy.ru

Амилаза крови

Амилаза вырабатывается поджелудочной железой и участвует в расщеплении крахмала и гликогена до глюкозы. Амилаза – это один из ферментов, участвующих в пищеварении. Наибольшее содержание амилазы определяется в поджелудочной железе и слюнных железах.

Существует несколько видов амилазы – α-амилаза, β-амилаза, γ-амилаза, из которых наибольшее распространение получило определение активности α-амилазы. Именно концентрацию этого вида амилазы определяют в крови в лаборатории.

В крови человека содержится два типа α-амилазы – Р-тип и S-тип. В моче присутствует 65% Р-типа α-амилазы, а в крови до 60% составляет S-тип. Р-тип α-амилазы мочи в биохимических исследованиях называют диастаза, во избежание путаницы.

Активность α-амилазы в моче в 10 раз выше, чем активность α-амилазы в крови. Определение активности α-амилазы и диастазы используют для диагностики панкреатитов и некоторых других заболеваний поджелудочной железы. При хронических и подострых панкреатитах используют определение активности α-амилазы в соке двенадцатиперстной кишки.

Норма амилазы крови

название анализа	норма в мккатал/л	единицы измерения в Ед/л (Е/л)
активность амилазы крови	16-30 мккатал/л	20-100 Ед/л
активность диастазы (амилазы) мочи	28-100 мккатал/л	до 1000 Ед/л

Повышение амилазы крови

Повышение активности α-амилазы в крови называется гиперамилаземия, а повышение активности диастазы мочи – гиперамилазурия.

Повышение амилазы крови выявляется при следующих состояниях:

• в начале острого панкреатита, максимум достигается через 4 часа от начала приступа, а снижается до нормы на 2-6 сутки от начала приступа (повышение активности α-амилазы возможно в 8 раз)
• при обострении хронического панкреатита (при этом активность α-амилазы возрастает в 3-5 раз)
• при наличии опухолей или камней в поджелудочной железе
• острая вирусная инфекция – свинка
• алкогольная интоксикация
• внематочная беременность

Когда амилаза мочи повышена?
Повышение концентрации амилазы в моче развивается в следующих случаях:

• при остром панкреатите происходит увеличение активности диастазы в 10-30 раз
• при обострении хронического панкреатита активность диастазы возрастает в 3-5 раз
• при воспалительных заболеваниях печени наблюдается умеренное повышение активности диастазы в 1,5-2 раза
• острый аппендицит
• холецистит
• кишечная непроходимость
• алкогольная интоксикация
• кровотечения из язвы желудочно-кишечного тракта
• при лечении сульфаниламидными препаратами, морфином, мочегонными средствами и оральными контрацептивами

При развитии тотального панкреонекроза, раке поджелудочной железы и хроническом панкреатите активность α-амилазы может не увеличиваться.

Снижение амилазы крови и мочи

Существуют состояния организма, при которых активность α-амилазы может снижаться. Низкая активность диастазы мочи выявляется при тяжелом наследственном заболевании – муковисцидозе.

В крови снижение активности α-амилазы возможно после приступа острого панкреатита, при панкреонекрозе, а также при муковисцидозе.

Несмотря на то, что α-амилаза присутствует в почках, печени и поджелудочной железе, определение ее активности в основном используют в диагностике заболеваний поджелудочной железы.

Как сдать анализ на амилазу?

Для определения активности амилазы сдается кровь из вены, утром, натощак или средняя порция утренней мочи. Накануне перед сдачей анализа необходимо избегать жирной и острой пищи. При остром приступе панкреатита кровь из вены и моча сдаются в независимости от времени суток.В настоящее время в большинстве лабораторий используются ферментативные методы определения активности амилазы. Этот метод достаточно точен, высоко специфичен и занимает недлинный промежуток времени.

Липаза

Строение, виды и функции липазы
Липаза – это один из пищеварительных ферментов, который участвует в расщеплении жиров.Для работы данного фермента необходимо присутствие желчных кислот и кофермента, который называется колипаза. Липаза вырабатывается различными органами человека – поджелудочной железой, легкими, лейкоцитами.

Наибольшее диагностическое значение имеет липаза, которая синтезируется в поджелудочной железе. Поэтому определение активности липазы применяют преимущественно в диагностике заболеваний поджелудочной железы.

Норма липазы крови

Норма активности липазы

активность липазы крови

13 — 60

Ед/мл

Липаза в диагностике заболеваний поджелудочной железы
Для диагностики заболеваний поджелудочной железы липаза является более специфичным тестом, чем амилаза, поскольку ее активность остается нормальной при внематочной беременности, остром аппендиците, свинке и заболеваниях печени. Поэтому при возникновении подозрения на наличие панкреатита целесообразно определять активность липазы и амилазы одновременно.Повышение активности липазы сыворотки крови при остром панкреатите возможно от 2 до 50 раз относительно нормы. Для выявления именно острого алкогольного панкреатита используют соотношение активности липазы и амилазы, причем если данное соотношение больше 2, то данный случай панкреатита, несомненно, алкогольного происхождения.Повышение активности амилазы в крови происходит через 4-5 часов после приступа острого панкреатита, достигает максимума через 12-24 часа и остается повышенной в течение 8-12 дней. При развитии острого панкреатита активность липазы в сыворотке крови может увеличиваться раньше и значительнее, чем активность амилазы.

Когда липаза крови повышена?

При каких состояниях повышается активность липазы в сыворотке крови:

• острый панкреатит
• различные опухоли и опухолевидные образования поджелудочной железы
• холециститы
• холестаз
• прободение язв
• болезни обмена веществ – сахарный диабет, подагра, ожирение
• прием лекарств (гепарин, наркотические обезболивающие, снотворные барбитурового ряда, индометацин)

Также повышение активности липазы возможно при травмах, ранениях, операциях, переломах и острой почечной недостаточности. Однако повышенная активность липазы при указанных состояниях не является специфичной для них, поэтому в диагностике данных заболеваний не используется.

Когда уровень липазы крови понижен?

Снижение активности липазы в сыворотке крови наблюдается при опухолях различной локализации (кроме поджелудочной железы), удаленной поджелудочной железе,неправильном питании или наследственной триглицеридемии.

Как подготовится к анализу на липазу?

Для определения активности липазы сдается кровь из вены, утром, натощак. Накануне вечером перед сдачей анализа не следует принимать жирную, острую и пряную пищу. В случае экстренной необходимости кровь из вены сдается в независимости от времени суток и предшествовавшей подготовки.В настоящее время для определения активности липазы чаще всего используют иммунохимический метод или ферментативный. Ферментативный метод более быстрый и требует меньшей квалификации персонала.

Лактатдегидрогеназа (ЛДГ)

Лактатдегидрогеназа (ЛДГ) – это фермент, который содержится в цитоплазме клеток почек, сердца, печени, мышц, селезенки, поджелудочной железы. Коферментом ЛДГ являются ионы цинка и никотинамидадениндинуклеотид (НАД). ЛДГ участвует в обмене глюкозы, катализируя превращение лактата (молочной кислоты) в пируват (пировиноградную кислоту). В сыворотке крови имеется пять изоформ данного фермента.ЛДГ1 и ЛДГ2 изоформы сердечного происхождения, то есть содержатся преимущественно в сердце. ЛДГ3, ЛДГ4 и ЛДГ5 – печеночного происхождения.

Норма лактатдегидрогеназы (ЛДГ) крови

Нормы ЛДГ крови

взрослые	0,8-4 мкмоль/ч*л	140-350 Ед/л
новорожденные	2,0-8 мкмоль/ч*л	400-700 Ед/л

Диагностическое значение изоформ ЛДГ

Для диагностики различных заболеваний большей информативностью обладает определение активности именно изоформ ЛДГ. Например, при инфаркте миокарда наблюдается значительное повышение ЛДГ1. Для лабораторного подтверждения инфаркта миокарда определяют соотношение ЛДГ1/ЛДГ2, и, если данное соотношение больше 1, значит у человека был инфаркт миокарда. Однако такие тесты широко не используютсяввиду их дороговизны и сложности. Обычно проводят определение общей активности ЛДГ, которая складывается из суммарной активности всех изоформ ЛДГ.

ЛДГ в диагностике инфаркта миокарда
Рассмотрим диагностическое значение определения суммарной активности ЛДГ. Определение активности ЛДГ используют для поздней диагностики инфаркта миокарда, поскольку увеличение его активности развивается через 12-24 часа после приступа и может сохраняться на высоком уровне до 10-12 суток. Это очень важное обстоятельство при обследовании больных, поступивших в лечебное учреждение после приступа. Если увеличение активности ЛДГ незначительно, значит, мы имеем дело с мелкоочаговым инфарктом, если, напротив, увеличение активности длительное – значит, речь идет об обширном инфаркте.У больных стенокардией активность ЛДГ увеличена в первые 2-3 дня после приступа.

ЛДГ в диагностике гепатита
Активность суммарной ЛДГ может увеличиваться при остром гепатите (за счет увеличения активности ЛДГ4 и ЛДГ5). При этом активность ЛДГ в сыворотке крови повышается в первые недели желтушного периода, то есть в первые 10 дней.

Норма ЛДГ у здоровых людей:

Возможно повышение активности ЛДГ у здоровых людей (физиологическое) после физических нагрузок, во время беременности и после принятия алкоголя. Кофеин, инсулин, аспирин, ацебутолол, цефалоспорины, гепарин, интерферон, пенициллин, сульфаниламиды также вызывает увеличение активности ЛДГ. Поэтому при приеме данных препаратов нужно учитывать возможность повышенной активности ЛДГ, которая не говорит о наличии патологических процессов в организме.

Причины повышенной ЛДГ крови

Вообще повышение активности ЛДГ в сыворотке крови может выявляться при следующих патологических состояниях:

• инфаркт миокарда
• острый гепатит (вирусный, токсический)
• цирроз печени
• раковые опухоли различной локализации (тератомы, дисгерминомы яичников)
• травмы мышц (разрывы, переломы и т.д.)
• острый панкреатит
• патология почек (пиелонефрит, гломерулонефрит)
• гемолитическая анемия, В12-дефицитная и фолиево дефицитная анемии
• лейкоз

ЛДГ может иметь сниженную активность на фоне уремии (увеличения концентрации мочевины).

Как сдать анализ на ЛДГ?

Для определения активности ЛДГ сдается кровь из вены, утром, натощак. Особой диеты или ограничений перед сдачей анализа нет. ЛДГ присутствует в эритроцитах, поэтому сыворотка для исследования должна быть свежей, без следов гемолиза. В настоящее время активность ЛДГ чаще всего определяют ферментативным методом, который надежен, специфичен и достаточно быстр.

Аланинаминотрансфераза (АЛТ, АлАТ)

Аланинаминотрансфераза (АЛТ, АлАТ) – фермент, относящийся к аминотрансферазам (трансаминазам), то есть осуществляющим перенос аминокислот с одной биологической молекулы на другую. Поскольку в названии фермента присутствует аминокислота аланин, это означает, что данный фермент переносит именно аминокислоту аланин. Коферментом АСТ является витамин В6. АЛТ синтезируется в клетках, поэтому в норме его активность в крови невысока. Преимущественно синтезируется в клетках печени, но также имеется в клетках почек, сердца, мышцах и поджелудочной железе.

Норма Аланинаминотрансферазы (АЛТ / АлАТ) крови

Норма АЛТ/АлАт

для мужчин	до 40	Ед/л
для женщин	до 32	Ед/л

Повышение активности АЛТ у здоровых людей (физиологическое) может быть вызвано приемом некоторых лекарственных препаратов (антибиотиков, барбитуратов,наркотиков, противоопухолевых препаратов, оральных контрацептивов, нестероидных противовоспалительных препаратов, дикумаринов, эхинацеи, валерианы), сильными физическими нагрузками, травмами. Также высокая активность АЛТ наблюдается у подростков в период интенсивного роста.

АЛТ в диагностике заболеваний печени
При диагностике патологических состояний организма повышение активности АЛТ является специфическим признаком острого заболевания печени. Повышение активности АЛТ в крови выявляется за 1-4 недели до проявления симптомов болезни и за 7-10 дней до появления максимального уровня билирубина в крови. Увеличение активности АЛТ при остром заболевании печени составляет 5-10 раз. Повышенная активность АЛТ в течение длительного времени или повышение ее в поздние сроки заболевания свидетельствует о начале массивного некроза печени.

Причины высокого АлАТ (АлАТ)

Высокая активность АЛТ в крови выявляется при наличии таких патологий:

• острый гепатит
• цирроз
• механическая желтуха
• введение гепатотоксических препаратов (например, некоторые антибиотики, отравление солями свинца)
• распад большой опухоли
• рак печени или метастазы в печени
• ожоговая болезнь
• обширный инфаркт миокарда
• травматические повреждения мышечной ткани

У больных мононуклеозом, алкоголизмом, стеатозом (гепатозом), перенесших операции на сердце, также может наблюдаться небольшое повышение активности АЛТ.

При тяжелых заболеваниях печени (цирроз тяжелой формы, некроз печени), когда сокращается количество активных клеток печени, а также при дефиците витамина В6, в крови наблюдается снижение активности АЛТ.

Как сдать анализ на АЛТ (АлАТ)?

Кровь для определения активности АЛТ берется из вены, утром, натощак. Специальной диеты не требуется. Однако стоит проконсультироваться с врачом и отменить на несколько дней прием лекарств, которые вызывают изменение активности АЛТ. Активность АЛТ оценивают ферментативным методом, который специфичен, достаточно прост в использовании и не требует длительной и особой пробоподготовки.

Аспартатаминотрансфераза (АСТ, АсАТ)

AСТ — строение и функция фермента
Аспартатаминотрансфераза (АСТ, АсАТ) – фермент из группы трансаминаз, который осуществляет перенос аминокислоты аспартата с одной биологической молекулы на другую. Коферментом АСТявляется витамин В6. АСТ является внутриклеточным ферментом, то есть в норме находится в клетках. В клетках фермент может присутствовать в цитоплазме и митохондриях. Наибольшая активность АСТ выявлена в сердце, печени, мышцах и почках. В крови присутствует в основном цитоплазматическая фракция АСТ.

Норма Аспартатаминотрансферазы (АСТ / АсАТ)

Возможны более высокие значения активности АСТ у здоровых людей (физиологические) при чрезмерных мышечных нагрузках, приеме некоторых лекарств, например, эхинацеи,валерианы,алкоголя, больших доз витамина А, парацетамола, барбитуратов, антибиотиков и т.д.

Норма АСТ/АсАт

для мужчин	15-31	Ед/л
для женщин	20-40	Ед/л

Активность АСТ в сыворотке крови повышается в 4-5 раз при инфаркте миокарда и сохраняется таковой в течение 5 дней. Если активность АСТ держится на высоком уровне и не снижается в течение 5 дней после приступа, то это говорит о неблагоприятном прогнозе для больного с инфарктом миокарда. Если наблюдаются ещё повышения активности фермента в крови, то данный факт свидетельствует о расширении зоны инфаркта.

При некрозе или повреждении печеночных клеток также повышается активность АСТ. Причем чем выше активность фермента, тем больше степень повреждения.

Почему Аспартатаминотрансфераза (АСТ, АсАТ) повышена?

Повышение активности АСТ крови присутствует в следующих случаях:

• гепатиты
• некроз печени
• цирроз
• алкоголизм
• рак печени и метастазы в печени
• инфаркт миокарда
• наследственные и аутоиммунные заболевания мышечной системы (миодистрофия Дюшена)
• мононуклеоз
• гепатоз
• холестаз

Существует еще целый ряд патологических состояний, при которых также происходит увеличение активности АСТ. К таким состояниям относят – ожоги, травмы, тепловой удар, отравление ядовитыми грибами.

Низкая активность АСТ наблюдается при дефиците витамина В6 и наличии обширных повреждений печени (некроз, цирроз).

Однако в клинике используют определение активности АСТ в основном для диагностики повреждений сердца и печени. При других патологических состояниях активность фермента также изменяется, однако ее изменение не является специфичным, следовательно, не представляет высокой диагностической ценности.

Коэффициент де Ритиса. Как отличить инфаркт от повреждения печени

Для дифференциальной диагностики повреждений печени или сердца используют коэффициент де Ритиса. Коэффициент де Ритиса – это соотношение активности АСТ/АЛТ, который в норме составляет 1,3. Увеличение коэффициента де Ритиса выше 1,3 характерно для инфаркта миокарда, и снижение его ниже 1,3 – выявляется при заболеваниях печени.

Щелочная фосфатаза (ЩФ)

Щелочная фосфатаза (ЩФ) – является мембранным ферментом, который локализован в щеточной каемке желчных канальцев. ЩФ может быть кишечной, плацентарной и неспецифичной (в тканях печени, почек и костей). Данный фермент является ключевым в обмене фосфорной кислоты.

Норма щелочной фосфатазы крови

взрослые	30-90	Ед/л
подростки	до 400	Ед/л
беременные	до 250	Ед/л

Возрастает активность ЩФ в крови здоровых людей (физиологическое повышение) при передозировке витамина С, недостаточности кальция и фосфора в пищевом рационе, приеме оральных контрацептивов, гормональных препаратов эстрогенов и прогестеронов, антибиотиков, сульфаниламидов, магнезии, омепразола, ранитидина и прочее.

Щелочная фосфатаза в диагностике заболеваний печени и желчных путей
Высокой специфичностью и диагностическим значением обладает определение активности ЩФ при подозрении на заболевания печени. При обтурационной желтухе происходит увеличение активности ЩФ крови в 10 раз относительно нормы. Определение данного показателя используется для лабораторного подтверждения именно этой формы желтухи. В меньшей степени увеличение активности ЩФ происходит при гепатитах, холангитах, язвенном колите, кишечных бактериальных инфекциях и тиреотоксикозе.

Значение щелочной фосфатазыпри заболеваниях костей и в травматологии
ЩФ является маркерным ферментом остеосинтеза, то есть увеличивается активность при заболеваниях костей или метастазах опухолей в кость, а также при заживлении переломов.

Причины повышения щелочной фосфатазы

Высокую активность ЩФ выявляют при следующих патологиях:

• обтурационная желтуха
• опухоли кости или метастазы в кости
• гипертиреоз
• заболевания крови (миеломная болезнь, лимфогранулематоз, мононуклеоз)
• рахит
• деструктивные заболевания печени (цирроз, рак, туберкулез)
• белые инфаркты (почки, легкого)
• амилоидоз

Причины низкого уровня  щелочной фосфатазы

Помимо высокой активности ЩФ в крови имеются состояния, при которых активность фермента снижена.В первую очередь подобное явление развивается при недостатке цинка, магния, витаминов В12 или С (цинга) в рационе питания. Низкая активность ЩФ крови сопровождает также следующие патологические состояния организма человека – анемии, недостаточность формирования плаценты при беременности, гипертиреоз и нарушения роста и формирования костей.

Как сдать анализ на щелочную фосфатазу?

Для определения активности ЩФ берется кровь из вены, утром, натощак. Соблюдение специальной диеты не требуется. Нужно обратить внимание на то, что некоторые препараты могут снижать или повышать активность ЩФ, поэтому необходимо проконсультироваться у врача, стоит ли отменить прием данных препаратов на небольшой промежуток времени. В современных лабораториях активность фермента оценивается по скорости протекания ферментативной реакции. Данный метод обладает высокой специфичностью, простотой, надежностью и не требует больших временных затрат на проведение анализа.

Итак, мы рассмотрели основные ферменты, активность которых определяют в биохимическом анализе крови. Следует помнить, что постановка диагноза не может основываться лишь на данных лабораторных показателей, необходимо учитывать анамнез, клинику и данные других обследований. Поэтому приведенные данные целесообразно использовать для консультации, но при выявлении каких-либо отклонений от нормы следует обратиться к врачу.

Автор: Наседкина А.К.

Источник: www.polismed.com

Биохимические методы исследования активности липаз

Биохимические методы исследования активности липаз, применяемые в клинике, основаны либо на нефелометрической регистрации убыли субстрата в ходе реакции, либо на количественном определении образующихся продуктов гидролиза: спирта или неэтерифицированных жирных к-т.

Нефелометрические методы, основанные на измерении просветления жировой эмульсии под действием фермента, удобны и просты; однако точность их невысока и в процессе гидролиза не сохраняется пропорциональность между концентрацией фермента и скоростью гидролиза. Поэтому эти методы пригодны только для быстрого получения качественных и сравнительных данных; к ним относится метод Боргстрема, предложенный для быстрого определения активности панкреатической Л. в дуоденальном содержимом. Он основан на фотометрическом измерении снижения оптической плотности (мутности) эмульсии триолеина под действием содержимого тонкого кишечника. Во время пищеварения в содержимом тонкого кишечника этим методом обнаружено 50 — 100 ед. липазной активности (за единицу активности условно принято то количество фермента, к-рое уменьшает оптическую плотность эмульсии триолеина с 0,90 до 0,80 за 1 мин.).

Большинство методов определения активности Л. основано на титриметрическом определении количества жирных к-т, образовавшихся в результате гидролиза субстрата (напр., метод Титца, по к-рому жирные к-ты титруют щелочью). Одним из лучших методов определения количества жирных к-т является описанный Доулом (V. P. Dole) метод микротитрования, включающий экстрагирование жирных к-т из реакционной смеси органическими растворителями при кислом значении pH. Хорошие результаты дают также методы Титца и Роу. Они менее трудоемки, чем метод Доула, за счет исключения стадии экстрагирования жирных к-т из реакционной смеси. Свободные жирные к-ты титруют 0,05 н. NaOH в присутствии индикатора. У здорового человека липазная активность сыворотки крови, определяемая по методу Титца, составляет 4.5 ±2,7 ед. (мкмоль/час/мл). При остром панкреатите наблюдается повышение липазной активности до 20—55 ед. (мкмоль/час/мл).

Все упомянутые методы основаны на использовании в качестве субстрата для действия Л. эмульсии оливкового масла. Описаны методы определения активности липазы с применением трибутирина в качестве субстрата. Однако необходимо помнить, что трибутирин не отвечает требованиям, которые предъявляются к субстрату Л. По-видимому, ферментативная активность, к-рую обнаруживают в биол, жидкости или экстракте по отношению к трибутирину, принадлежит совместно липазе и эстеразе. Еще менее специфичен метод определения липолитической активности сыворотки крови с использованием в качестве субстрата твина-80 (метод Шатерникова — Савчука). Твин-30, представляющий собой сложный эфир жирных к-т — пальмитиновой и олеиновой, в которых место алифатического спирта занимают производные углеводоспиртов — сорбита или маннита, не является адекватным субстратом для Л. и в значительной степени гидролизуется присутствующими в сыворотке крови эстеразами.

Чувствительность метода определения продукта липолитической реакции — жирных к-т — можно повысить, применяя колориметрические методы (см. Колориметрия). Колориметрические методы основаны на том, что освобождающиеся в результате липолиза жирные к-ты экстрагируются, омыляются и собираются в фазе органического экстрагента. Затем добавляют краситель и окрашенный комплекс регистрируют спектрофотометрически. Хорошие результаты дают колориметрические методы — метод Дамкумба, метод Дирстина с соавт., метод Медковой с соавт., основанные на образовании медных солей жирных к-т, экстрагировании их органическим растворителем и последующем определении меди в виде окрашенного комплекса с диэтилдитиокарбаматом натрия. Существуют более чувствительные модификации этих методов. Установлено, что чувствительность метода можно повысить в 4—0 раз, применяя вместо диэтилдитиокарбамата натрия 1,5-дифенилкарбогидразид.

Нормальные значения активности Л. в крови человека, определяемые колориметрическими методам и, колеблются от 0 до 199 мкмоль/мин•л. При заболеваниях поджелудочной железы активность липазы в крови может резко повышаться, особенно при остром панкреатите — до 16 000 — 68 000 мкмоль/мин•л.

Чтобы сделать определение Л. менее трудоемким и повысить его чувствительность, были предложены методы с использованием в качестве субстратов хромогенных соединений, таких как эфиры жирных к-т с эозином, флюоресцеином, нафтолом (метод Зелигмана — Крамера) и др. Под действием Л. из таких соединений освобождается спирт (эозин, флюоресцеин, нафтол и др.), который определяют или непосредственно в реакционной смеси или после проведения реакции диазосочетания. Однако эти методы, какими бы удобными они ни были, не дают надежных результатов, т. к. хромогенные субстраты плохо расщепляются истинными Л. и наблюдаемая ферментативная активность принадлежит в значительной мере неспецифическим эстeразам.

Гистохимические методы определения липаз в тканях

Л. локализуются преимущественно на мембранах эндоплазматического ретикулума и в лизосомах. В связи с большой способностью к диффузии и нестабильностью этих ферментов перед проведением гистохим, реакций необходима соответствующая фиксация материала. Для этой цели наиболее часто используют замораживание ткани или ее фиксацию в холодном нейтральном р-ре формалина с последующим приготовлением замороженных срезов.

Гистохим, определение Л. в тканях основано на реакции гидролиза специально подобранного субстрата, подвергающегося расщеплению под действием этого фермента. Образующийся продукт гидролиза связывается ионами металлов с образованием нерастворимых окрашенных солей. В качестве основной методики для выявления Л. в тканях используют реакцию Гомори, к-рая заключается в отщеплении тканевой Л. жирной к-ты от твина-80. Преимуществом твинов перед естественными субстратами Л.— жирами — является их водорастворимость. Срезы инкубируют в р-ре с pH 7,2 —7,4, содержащем твин-80. Под действием фермента из соединения с сорбитом (или маннитом) освобождается жирная к-та, к-рая осаждается присутствующими в среде ионами кальция с образованием кальциевых мыл. В дальнейшем неокрашенные кальциевые мыла в результате реакции с сернистым натрием и азотнокислым свинцом переводятся в нерастворимый сернистый свинец, осадок к-рого окрашен в коричневый цвет.

Недостаток описанных гистохим, реакций заключается в их малой специфичности: большинство этих реакций являются не избирательными для истинных Л. реакциями, а групповыми. Применение специфических ингибиторов эстераз, а также использование различных субстратов дает возможность повысить информативность гистохим. реакций на Л.

См. также Гидролазы, Ферменты.

Библиография: Биохимические методы исследования в клинике, под ред. А. А. Покооп-ского, с. 186, М., 1969; Б о г e p М. М., Корни л о в а В. А. и Д и к у л ь H. М. К методике определения активности липавы крови и дуоденального содержимого, Лаборат, дело, № 8, с. 480, 1973; Б р о-к e р х о ф X. и Дженсен Р. Л аполитические ферменты, пер. с англ.. М., 1978; Л e йтес Ф. Л. Гистохим ин липо-литических ферментов в норме и при патологии липоидного обмена, М., 1907, библиогр.; М а к к ь ю с и к В. А. Наследственные признак-и человека, пер. с англ., М., 1976; M e д к о в а И. Л. и д р. Метод определения активности панкреатической липазы в сыворотке крови, моче, дуоденальном содержимом и ткани поджелудочной железы, Лаборат, дело, № 3, с. 142, 1978; Принципы и методы гистоцитохимического анализа в патологии, под ред. А. П. Авцына и др., с. 191, Л., 1971; Рахимов М. М. и Джан- б а e в a H. Р. Липолитические ферменты, Усп. совр, биол., т. 81, в. 3 (6), с. 323, 1977, библиогр.; Харрис Г. Основы биохимической генетики человека, пер. с англ., М., 1973; ШатерниковВ.А. и С а в ч у к Л. А. Определение липолитической активности сыворотки крови, Лаборат, дело, № 2, с. 84, 1966; В о г g-strom В. Determination of pancreatic lipase in human small intestina content, Scand. J. Clin. Lab. Invest., v. 9, p. 226, 1957; D esnuelle P. The lipases, в кн.: The enzymes, ed. by P. D. Boyer, v. 7, p. 575, N.Y., 1972; Dirstine P. H., S o b e 1 С. a. Henry R. J. A new rapid method for the determination of serum lipase, clin. Chem., v. 14, p. 1097, 1968; Dole V. P. a. M e i n e r t z H. Microdetermination of long-chain fatty acids in plasma and tissues, J. biol. Chem., v. 235, p. 2595, 1960; Erlanson C. a. B o r g-strom B. Tributyrine as a substrate for determination of lipase activity of pancreatic juice and small intestinal content. Scand. J. Gastroenterol., v. 5, p. 293, 1970; M a-h a d e v a n S., D i 1 1 a r d C. J. a. T a p-p e 1 A. L. A modified colorimetric micromethod for long-chain fatty acids and its application for assay of lipolytic enzymes, Ann. Biochem., v. 27, p. 387, 1969; Roe J. H., T i с k t i n H. E. a. Schneider M. Determination and clinical significance of serum lipase, Enzym. biol, clin., t. v, p. 73, 1966; T i e t z N. W. a. Fiereck E. A. A specific method for serum lipase determination, Clin. chim. Acta, v. 13, p. 352, 1966; W i 1 1 s E. D. Lipases, Advanc. Lipid Res., v. 3, p. 197, 1965.

Т.П. Левчук; Г .М. Могилевский (гистохим.).

Источник: xn--90aw5c.xn--c1avg

Активация триацилглицерол-липазы

Гормонзависимая активация липолиза в адипоцитах адреналином и глюкагоном происходит при напряжении организма (голодание, длительная мышечная работа, охлаждение). Активность ТАГ-липазы зависит, главным образом, от соотношения инсулин / глюкагон.

В целом последовательность событий активации липолиза по классической, но устаревшей, схеме выглядит следующим образом:

1. Молекула гормона (адреналин, глюкагон, АКТГ) взаимодействует со своим рецептором.
2. Активный гормон-рецепторный комплекс воздействует на мембранный G-белок.
3. G-белок активирует фермент аденилатциклазу.
4. Аденилатциклаза превращает АТФ в циклический АМФ (цАМФ) – вторичный посредник (мессенджер).
5. цАМФ аллостерически активирует фермент протеинкиназу А.
6. Протеинкиназа А фосфорилирует ТАГ-липазу и активирует ее.
7. ТАГ-липаза отщепляет от триацилглицеролов жирную кислоту в 1 или 3 положении с образованием диацилглицерола (ДАГ).

Каскадный механизм активации ТАГ-липазы

Кроме гормонов, влияющих на активность аденилатциклазы через G-белки, существуют иные механизмы активации. Например, соматотропный гормон увеличивает количество аденилатциклазы, глюкокортикоиды способствуют синтезу ТАГ-липазы.

Снижение активности ТАГ-липазы

Инсулин препятствует активации липолиза другими гормонами, т.к.

• он активирует фермент фосфодиэстеразу, которая гидролизует цАМФ, что останавливает каскадную активацию ТАГ-липазы,
• активирует протеинфосфатазы, дефосфорилирующие ТАГ-липазу .

Источник: biokhimija.ru