Фибрин мономер

ОПРЕДЕЛЕНИЕ НАРУШЕНИЙ КОНЕЧНОГО ЭТАПА СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ  КАК ОДИН ИЗ «ГЛОБАЛЬНЫХ» ТЕСТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ СИСТЕМЫ ГЕМОСТАЗА

Система гемостаза, как известно, филогенетически предназначена для остановки кровотечения при травме и обеспечения жидкого состояния крови при сохранении биологической целостности сосудистой стенки. Нарушения в этой системе способны стать причиной развития как кровотечений, так и наоборот, тромбозов.

При лабораторном скрининге нарушений гемостаза в клинической практике широко используют так называемые «глобальные» тесты, призванные оценивать изменения гемостатических реакций в целом и не способные распознавать отдельные причины этих нарушений. Чаще всего при интерпретации их результатов имеет место заключение о наличии гипо- или гиперкоагуляционного сдвига коагулограммы. В число этих тестов входят протромбиновое время свертывания и активированное парциальное тромбопластиновое время (АПТВ/АЧТВ), с помощью которых оценивают свертывание крови соответственно по внешнему и внутреннему механизму гемокоагуляции.

дополнение к ним часто используется тромбиновое время (ТВ) свертывания, данные которого, как принято считать, отражают нарушения конечного этапа свертывания, при котором фибриноген под действием тромбина превращается в фибрин. Однако измерение ТВ мало информативно, поскольку этот тест крайне редко меняет свои значения при проведении исследований в клинике, и удлиняет свои показатели лишь при глубоком снижении концентрации фибриногена (менее 1,0 г/л) либо при активной гепаринотерапии.

В Алтайском филиале ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздравсоцразвития России (директор — д.м.н., профессор А.П. Момот) разработан новый метод оценки конечного этапа свертывания крови по стандартизированному определению времени самосборки фибрин-мономера в плазме крови пациента. (Патент РФ 2366955 от 10.09.2009). На основе этого метода фирмой «Технология-Стандарт» зарегистрирован в России и производится набор реагентов «Тех-Полимер-тест» .

Ниже приводятся результаты клинико-лабораторной апробации нового «глобального» метода оценки конечного этапа свертывания крови у больных с геморрагическим синдромом и при венозных тромбозах.

Принцип метода. Определяется время свертывания плазмы крови под действием тромбина стандартной активности в присутствии фиксированной концентрации ингибитора полимеризации фибрин-мономеров (ФМ). Данный показатель отражает динамику образования и время полимеризации ФМ в исследуемом образце плазмы крови.

Подготовка реагентов к работе и ход определения приведен в Инструкции к набору реагентов «Тех-Полимер-тест».

Оценка результатов:

1. Отмечают время полимеризации в секундах у боль­ного с указанием значе­ний, полученных при иссле­до­ва­нии контрольной плаз­мы.

2. Рассчитывают показатель R по фор­­му­ле:

            t  ₁

R = ________    , где

            t ₂

t ₁ — время полимеризации в плазме больного

t ₂ — время полимеризации в контрольной плазме

В норме R со­ответствует диапазону 0,80-1,20.

Интерпретация результатов: показатели R более 1,20, свидетельствуют о наличии дисфибриногенемии либо гипокоагуляционного сдвига, обусловленного нарушением фибринообразования. Снижение R менее 0,80 соответствует гиперкоагуляционном сдвиге на конечном этапе свёртывания крови.

Клинико-лабораторная апробация нового «глобального» теста была проведена на образцах плазмы 111 больных с геморрагическим синдромом различного происхождения (геморрагические мезенхимальные дисплазии, гемофилия, цирроз печени), а так же у 80 больных с активацией внутрисосудистого свертывания крови (тяжелый гестоз, тяжелая пневмония, пиелонефрит, антифосфолипидный синдром, политравма, верифицированный венозный тромбоз, ТЭЛА).

Контрольные показатели по результатам обследования здоровых людей (при исследовании на полуавтоматическом коагулометре Минилаб-701 и 704):

Х =30,7;

s =3,01;

m =0,46;

время свертывания — 24,5-37,8 сек;

коэффициент вариации 8,5%.

Таблица 1

Время полимеризации ФМ в сравнении с тромбиновым и рептилазным временами свертывания у обследованных пациентов

и у практически здоровых людей

Апробация нового теста у больных с типовыми нарушениями гемокоагуляции показала, что его результаты имеют, как правило, самостоятельное значение. В частности, коэффициент корреляции (Спирмена) его значений с результатами АПТВ составил 0,151, протромбинового теста -0,112, ТВ 0,100. Наряду с этим, корреляция изучаемого показателя с уровнем РФМК в плазме была высоко достоверной и составила -0,49 (P<0,001) в группе больных с тромбозами или наклонностью к внутрисосудистому свертыванию крови. Близкие значения связи были получены и при сопоставлении с другими маркерами тромбинемии (табл. 2).

Таблица 2

Коэффициент корреляции между результатами оценки полимеризации ФМ и уровнем классических маркеров тромбинемии у больных с острыми

венозными тромбозами

Примечание: * — по результатам орто-фенантролинового теста.

Заключение. Полученные данные позволяют отнести разработанный метод к числу новых информативных «глобальных» тестов. Он имеет самостоятельное значение при оценке гипокоагуляции на конечном этапе свертывания, диагностике дисфибриногенемии, выявлении мезенхимальной дисплазии, более чувствителен, чем тромбиновое или рептилазное (анцистроновое) время свертывания. Тест может использоваться также в качестве нового потенциального маркера гиперкоагуляционных состояний.

СКАЧАТЬ ФАЙЛ: Методический материал Тех-Полимер-тест.zip

Источник: tehnologia-standart.ru

Зачем оценивать гемостаз?

В списке лабораторных анализов есть не только всем знакомая «клиника» и биохимия. Здесь можно увидеть загадочную аббревиатуру РФМК, что расшифровывается как «растворимый фибрин мономерный комплекс». Если кратко и просто объяснить значение этого понятия, то под ним подразумевают кусочки тромбов. Если оказывается, что в крови их чересчур много, это говорит о том, что, у человека сформировались большие тромбы.

РФМК – показатель, который дает возможность оценить гемостаз посредством определения количества фибрин-мономерных комплексов в плазме. Анализ (он еще называется «коагулограмма» либо «гемостазиограмма») покажет, как сворачивается кровь, сформировалась ли  предрасположенность к тромбообразованию и есть ли опасность закупорки сосуда сгустком крови.

Как берут анализ РФМК?

Если Вам выдали направление на РФМК, то не стоит бояться такой диагностики. Для пациента это стандартный анализ крови. Ее забор производят из локтевой вены. Биоматериалом для исследования является сыворотка крови. Чтобы ее получить, кровь, взятую у обследуемого,  помещают в центрифугу.

Чтобы результат был достоверным, к анализу следует подготовиться: нельзя употреблять алкоголь, пищу и что-либо пить за 8 часов до диагностики. Исключение составляет только вода. Также запрещено принимать любые лекарства. Желательно не переживать. Не следует выполнять тяжелую физическую работу.

Используется два варианта анализа — базовый и расширенный. Сначала проводится первый. Он помогает определить, где именно есть отклонения от нормальных показателей. Если потребуется, то проведут еще и расширенную диагностику, чтобы установить количество таких отклонений.

Сколько фибрина должно быть в крови?

Норма для взрослого человека – отрицательное значение, то есть в идеале фибрина в крови вообще быть не должно. Положительным принято считать результат, при котором в течение двух с половиной минут в плазме заметно образование фибрина. Используя специальные формулы расчета, диагност переведет время образования частиц в числовые значения РФМК.

Читайте также:

• Осмотр врача во время беременности
• Д димер при беременности: анализ и нормы

Нормальный РФМК – 3,38 +0,02 мг на 100 мл. Допустимый максимум – 4 мг.

Если растворимые фибрин мономерные комплексы повышены, это указывает на то, что  гемокоагуляция (сгущение крови) идет слишком интенсивно. Чем значительнее отклонение от нормы, чем больше риск образования тромбов в кровеносных сосудах.

Почему меняется уровень РФМК?

Фибрин мономерные комплексы повышаются в том случае, если активируется свертывающая система крови. Чем выше этот показатель, тем больше вероятность образования тромбов и внутрисосудистого свертывания.

РФМК может превышать норму по таким причинам:

Болезни:

• тромбофилия;
• тромбоз;
• гиперкоагуляционныйсиндром;
• ДВС-синдром;
• геморрагическийваскулит;
• эмболиялегочнойартерии;
• тяжелаятравма;
• ожог;
• патологиипечени.

Физиологические факторы:

• беременность;
• тяжелыйфизическийтруд;
• сильныйстресс;
• периодноворожденности.

Прочие причины:

• наследственность;
• неправильныйобразжизни;
• приемлекарств, влияющихнасвертываемость, внекорректныхдозахилибезразрешенияврача.

Как меняются нормы, если женщина беременна?

РФМК — это обязательное исследование для женщин в положении, так как оно проинформирует врача о возможных отклонениях в гемостазе. При беременности крайне важно, чтобы поддерживалось оптимальное соотношение всех элементов крови. Избыточное количество фибрина может закончиться появлением тромбов, а его нехватка приводит к кровотечениям.

Часто после сдачи такого анализа будущим мамочкам сообщают, что рфмк повышен. Что это значит? При беременности, чтобы не допустить массированной кровопотери в процессе родов, организм увеличивает свертываемость крови. Поэтому рост фибрина в таком состоянии – нормальное явление. И все же существуют определенные границы РФМК и для беременных. Они таковы:

• первыйтриместр – 5,5мгна100мл;
• второй – 6,5мгна100мл;
• третий – 7,5мгна100мл.

«Золотой стандарт» — 5 мг/мл.

Если  у женщины в положении рфмк повышен, что значит такое отклонение и какие последствия может вызвать? Это крайне нежелательно, потому что может привести к:

• развитиютромбозавен;
• нарушениюфункцийплаценты;
• гибелиплодавматеринскойутробе;
• срывубеременности;
• задержкеразвитияребенка.

Отклонения от нормы со знаком «минус»  также должны насторожить врачей, потому что это может осложнить роды — спровоцировать большие потери крови.

Снижение РФМК развивается на фоне приема препаратов, препятствующих свертыванию крови (Гепарина). Оно рассматривается как побочный эффект и проявляется склонностью к кровоточивости.

Источник: ladyspecial.ru

При ряде форм патологии, характеризующихся активацией свертывания крови (ДВС, тромбозы, тромбофилии), происходит расширение пула фибри­ногена. В норме в крови из пула фибриногена присут­ствует практически только сам фибриноген в коли­честве 1,8-3,5 г/л. Все остальные продукты (рис. 128) находятся в минимальном количестве, которое прак­тически не определяется лабораторными тестами.

При ДВС-синдроме за счет свободного тром­бина происходит постоянный процесс трансформа­ции фибриногена в фибрин с появлением в крови фибринопептидов А и В, накоплением мономеров фибрина. Активация фибринолиза сопровождает­ся повышенным образованием ПДФ. ПДФ взаимо­действуют с фибрин-мономерами, увеличивая ко­личество растворимых фибрин-мономерных комп­лексов (РФМК). РФМК — это фибрин-мономеры и олигомеры, а также их комплексы с ПДФ (рис. 129).

Паракоагуляционные тесты

Для выявления растворимых фибрин-моно­мерных комплексов (РФМК) в КДЛ традицион­но использовали так называемые паракоагуляци-

онные («гельобразующие») тесты — этаноловый и протаминсульфатный. Однако из-за качественной оценки результатов они малоинформативны. Раз­личные модификации протаминсульфатного те­ста с количественным и полуколичественным представлением результата малоточны и плохо воспроизводимы. Протаминсульфат связывается с гепарином, поэтому у больных, получавших ге­парин, протаминсульфатный тест дает отрица­тельный результат. В настоящее время эти тесты можно считать устаревшими.

В последнее время стал активно использо­ваться паракоагуляционный ортофенантролино-вый тест. С помощью ортофенантролинового теста возможно не только качественное, но и ко­личественное определение РФМК. Гепаринотера-пия с содержанием гепарина в плазме крови до концентрации 10 ед/мл не влияет на результаты теста. Ортофенантролиновый тест более чувстви­телен, чем другие паракоагуляционные тесты. Однако при остро протекающих (катастрофичес­ких) формах ДВС с глубокой гипофибриногене-мией показатели паракоагуляционных тестов могут снижаться. Краткая характеристика и ди­агностическое значение представленных выше и дополнительных тестов активации системы гемо­стаза даны в табл. 34.

В табл. 35 суммированы наиболее вероятные изменения лабораторных тестов при некоторых патологических состояниях.

Рис. 128. Пул метаболитов фибриногена в норме.Из

обозначенных продуктов в крови присутствует только сам фибриноген, Все остальные метаболиты находятся в исче-зающе малых количествах

Рис. 129. Пул метаболитов фибриногена при ДВС-син­дроме.Количество фибриногена снижается, появляются продукты деградации фибрина (ПДФ), фибринопептиды (ФПА и ФПВ), растворимые фибрин-мономерные комплек­сы (РФМК), РЭС — ретикулоэндотелиальная система

Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ

Таблица 34

Маркеры активации гемостаза

Изменение некоторых показателей активации гемостаза при патологии

Таблица 35

Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ

Обеспечение качества лабораторной оценки системы гемостаза

Контроль качества в коагулологии является центральным элементом обеспечения эффектив­ности диагностических исследований. Помимо непосредственного контроля за самой аналити­ческой процедурой, необходимо стандартизо­вать и контролировать взятие и подготовку об­разцов на преаналитическом этапе. Оценка по­лученных данных должна проводиться с учетом состояния пациента, используемых им лекар­ственных препаратов, особенностей подготовки образца на преаналитическом этапе, методики выполнения анализа, используемых инструмен­тов и реактивов. О высокой степени качества и

диагностической эффективности лабораторных исследований можно говорить лишь тогда, ког­да под контролем находится весь процесс от на­значения исследования и взятия биологическо­го материала до получения достоверного резуль­тата. Решающим фактором правильности вы­полнения исследования является проведение все­объемлющего внутрилабораторного контроля качества всех выполняемых тестов. Оптималь­ная система контроля предполагает оценку ка­чества лабораторных исследований на внутри-лабораторном, федеральном и международном уровнях.

Стандартные образцы (калибраторы)

Калибраторы требуются для многих тестов. Часто для практических целей используется све­жая сливная плазмаот нескольких (не менее 5, же­лательно более 20) здоровых доноров (пулирован-ная плазма, или пул-плазма). Основой применения пул-плазмы является представление о том, что при смешивании плазмы значительного количества здоровых доноров (в импортных пулах смешива­ется плазма десятков и сотен тысяч здоровых до­норов) активность практически всех факторов ге­мостаза становится средней для данной популяции и принимается за 100%, или 1 Ед/мл.

Тем не менее возможны колебания активнос­ти различных факторов в пул-плазмах, собран­ных в разных регионах. Это связано с нескольки­ми факторами:

• имеются генетически детерминированные
особенности активности различных факторов
в данной популяции людей;

• при использовании пула плазмы, набранной
от ограниченного количества доноров (20 и
менее), однонаправленные изменения актив­
ности фактора у нескольких из них могут вли­
ять на результирующую активность фактора
в пуле.

Эти факторы обуславливают необходимость федерального и международного контроля актив­ности различных факторов в пуле. Приготовле­ние пулированной плазмы для коагулологической

диагностики требует соблюдения некоторых ус­ловий:

• необходимо собрать плазму от достаточного
количества доноров в течение ограниченно­
го времени;

• пул-плазму необходимо тщательно переме­
шать до однородной массы;

• рационально хранить ее небольшими порци­
ями;

• температура хранения должна быть не выше
-40 °С.

Все это часто делает невозможным приготов­ление пул-плазмы в клинико-диагностической лаборатории. Однако у приготовленной на мес­те плазмы есть одно преимущество: активность факторов в ней соответствует средней для попу­ляции, проживающей в данном регионе.

Альтернативой пул-плазме являются коммер­ческие контрольные плазмы,которые готовятся на биологической матрице (лучшие из плазмы че­ловека) путем добавления определенных коли­честв факторов от тестированных доноров, или коммерческие пулированные плазмы,при изго­товлении которых смешивается плазма десятков и даже сотен тысяч доноров. Такие плазмы, как правило, проходят строгий международный кон­троль. В продаже имеются не только нормальные контрольные плазмы, но и плазмы, дефицитные по отдельным факторам.

Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ

Обычно на основе калибраторов делается се­рия разведений и строится калибровочная кри­вая. Как правило, для построения калибровочной кривой бывает достаточно 4 разведений. При не­линейной калибровке используют 6 разведений калибратора.

В соответствии с клиническими и аналитичес­кими потребностями предлагаются калибровоч­ные растворы для следующих основных коагуло-логических тестов:

• калибровочная плазма для установления ак­
тивности протромбина, факторов протром-
бинового комплекса и всех факторов сверты­
вания, определяемых коагуляционными ме­
тодами;

• калибровочная плазма для колориметричес­
ких методов определения AT, протеина С;

• калибровочная плазма для определения фиб­
риногена хронометрическим или оптичес­
ким методом на основе протромбинового
времени;

• калибровочная плазма для определения кон­
центрации нефракционированного и низко­
молекулярного гепарина.

Референтная плазма — централизованно при­готовленная нормальная плазма, критерии и про-

цедура приготовления которой определены в стандарте DIN58939-1.

Источник: studopedia.ru

Образование фибрина[править | править код]

Образуется фибрин в три стадии:

1. На первой стадии под действием тромбина от молекулы фибриногена отщепляются два пептида А (молекулярная масса около 2000) и два пептида Б (молекулярная масса около 2500) и образуется фибрин-мономер, построенный из двух идентичных субъединиц, соединённых дисульфидными связями. Каждая из субъединиц состоит из трёх неодинаковых полипептидных цепей, обозначаемых a, b, g.
2. На второй стадии фибрин-мономер самопроизвольно превращается в сгусток, называемый фибрин-агрегатом, или нестабилизированным фибрином. Агрегация фибрин-мономера (самосборка фибриновых волокон) включает переход молекулы из состояния глобулы в состояние фибриллы. В образовании фибрин-агрегата принимают участие водородные и электростатические связи и силы гидрофобного взаимодействия, которые могут быть ослаблены в концентрированных растворах мочевины и др. агентов, вызывающих денатурацию. Это приводит к восстановлению фибрин-мономера. Образование фибрин-агрегата ускоряется веществами, несущими положительный заряд (ионы кальция, протаминсульфат), и тормозится отрицательно заряженными соединениями (гепарин).
3. На третьей стадии фибрин-агрегат претерпевает изменения, обусловленные ферментативным воздействием фибринстабилизирующего фактора XIII а (или фибринолигазы). Под действием этого фактора образуются прочные ковалентные связи между g-, а также между a-полипептидными цепями молекул фибрин-агрегата, в результате чего он стабилизируется в фибрин-полимер, нерастворимый в концентрированных растворах мочевины. При врождённой или приобретённой недостаточности в организме фактора XIII и при некоторых заболеваниях фибрин-агрегат не стабилизируется в фибрин-полимер, что сопровождается кровоточивостью.

Фибрин получают путём промывки и высушивания кровяного сгустка. Из фибрина приготовляют стерильные губки и плёнки для остановки кровотечения из мелких сосудов при различных хирургических операциях.

Болезни[править | править код]

Чрезмерное количество фибрина в крови приводит к тромбозу, а нехватка фибрина предрасполагает к кровоизлияниям.

Дисфибриногенемия — заболевание печени, которое может привести к снижению синтезируемого фибриногена или к синтезу молекул фибриногена с пониженной активностью. Афибриногенемия (фиброген-дефицит), гипофиброгенемия и дисфибриногенемия — наследственные заболевания, связанные с мутациями генов четвертой хромосомы, приводящие соответственно к отсутствию синтеза фибриногена, к уменьшению количества синтезируемого фибриногена и к изменению его структуры и понижению активности.

Более распространены приобретенные формы дефицита фибриногена, которые могут быть обнаружены путём проведения лабораторных исследований плазмы крови или цельной крови путём тромбобластометрии. Причиной такого состояния могут быть гемодилюция, кровопотеря, некоторые случаи диссеминированного внутрисосудистого свёртывания, а также сепсис. У пациентов с дефицитом фибриногена коррекция его содержания в крови возможна путём инфузии свежезамороженной плазмы, криопреципитата или концентрированного фибриногена. Существует все больше свидетельств того, что коррекция дефицита фибриногена или нарушений его полимеризации очень важны для больных с кровотечением.

Локальные скопления фибрина в радужке глаза, преципитаты, являются симптомом иридоциклита.

Источник: ru.wikipedia.org