Способы получения плазмы и сыворотки крови


Подготовка обследуемых

Взятие венозной крови производится натощак, в утренние часы. При взятии венозной крови необходимо учитывать ряд факторов которые могут повлиять на результат гематологических исследований: физическое перенапряжение (бег, быстрая ходьба, подъем по лестнице), эмоциональное возбуждение, прием пищи накануне исследования, купение, прием алкоголя и т.д. Для исключения этих факторов, следует соблюдать следующие условия подготовки пациентов:
•    взятие венозной крови осуществляется после 15-минутного отдыха обследуемого;
•    пациент во время взятия сидит, у тяжелых больных взятие крови может осуществляться лежа.
•    курение, прием алкоголя и пищи непосредственно перед исследованием исключаются;
 
Основной способ взятия венозной крови для лабораторного исследования – пунктирование вены. Венозную кровь, как правило, забирают из локтевой вены. В случае необходимости ее можно получить из любой вены (запястья, тыла ладони, над большим пальцем и т.д.). У новорожденных и грудных детей кровь обычно берется из лобной, височной или яремной вены.
При взятии крови из вены необходимо избегать: мест шрамов, гематом; вен, используемых для переливания растворов; ножных вен (у больных диабетом, при нарушениях периферического кровотока, ангиопатиях).


Оборудование

Для венепункции можно использовать три варианта пункционных систем:
•    одноразовые пластиковые системы (вакутейнеры), состоящие из контейнера с навинчивающейся на него одноразовой иглой и пробирки с плотно прилегающей пробкой и вакуумом внутри;
•    одноразовые шприцы с подходящим диаметром иглы;
•    иглы с внутренним диаметром 0,55-0,65 мм.
 
Условия транспортировки венозной крови

Правильно собранная венозная кровь должна быть своевременно доставлена в лабораторию. При комнатной температуре время доставки не должно превышать 60 мин после взятия крови. Если доставка крови в лабораторию осуществляется в течении дня, то она хранится при температуре +40С-+60С (в холодильнике) и далее в специальных транспортных контейнерах в ледяной бане доставляется в лабораторию.
Во время транспортировки пробирки и контейнеры с кровью должны быть соответствующим образом защищены от вредного воздействия окружающей среды и погодных условий.


и транспортировке венозной крови должны строго соблюдаться правила техники безопасности, асептики и антисептики.
Пробирки должны быть промаркированы, упакованы и плотно закрыты. Упаковка должна быть удобной для транспортировки. Сроки хранения зависят от исследуемого показателя, температуры хранения и антикоагулянта, с помощью которого осуществляется взятие крови.

Методика получения сыворотки крови (без использования разделительных или вспомогательных средств для центрифугирования)

Оборудование
1.    Центрифужные стеклянные пробирки общим объемом 10-12 мл.
2.    Стеклянные палочки или Пастеровские пипетки с запаянными на конце капиллярами (для отделения сгустка).
3.    Центрифуга лабораторная (до 3000 об/мин).
 
Приготовление сыворотки

Венозная кровь, полученная без антикоагулянтов в центрифужную стеклянную пробирку, отстаивается в ней при комнатной температуре (15-200С) в течение 30 минут до полного образования сгустка. По окончании образования сгустка пробирки открывают и осторожно проводят тонкой стеклянной палочкой или запаянным капилляром Пастеровской пипетки по внутренним стенкам пробирки по окружности в верхнем слое крови для отделения столбика сгустка от стенок пробирки. Сыворотку сливают в другую центрифужную пробирку, придерживая сгусток стеклянной палочкой, и центрифугируют, либо центрифугируют в тех же, первичных, пробирках.


Центрифугирование

После ретракции сгустка пробы центрифугируют при относительной центробежной силе RCF от 1000 до 1200 xg (максимально до 1500 xg) в течение 10 минут.
В случае использования микропробирок и центрифуги для них центрифугирование проводят при 6000-15000 xg в течение 1,5 минут. После центрифугирования сыворотку сливают во вторичные (транспортные) пробирки. Сыворотка не должна быть гемолизированной.
Плазма получается из крови путем отделения клеток крови. Она представляет собой бесклеточную надосадочную жидкость, которая получается при центрифугировании крови, свертываемость которой ингибирована добавлением антикоагулянтов тотчас после взятия. В плазме содержатся факторы свертывания крови. В связи с тем, что плазма и сыворотка содержат около 93% воды, в отличие от цельной крови, которая содержит около 81% воды, концентрация компонентов в плазме на 12% выше, чем в цельной крови. Это может иметь принципиальное диагностическое значение при исследовании активности, например ЛДГ у которого наиболее высокая концентрация наблюдается в сыворотке крови, чем в плазме.
Широко применяются коммерческие системы для получения плазмы. Они представляют собой пробирки или устройства типа шприцев (“вакутейнер”) с вакуумом внутри, содержащие различные антикоагулянты и/или ингибиторы гликолиза. Как и в случае устройств для сыворотки, эти пробирки для плазмы имеют разные варианты, содержащие разделительные гели и гранулят из полистирола, ускоряющие получение плазмы, облегчающие транспортировку и хранение. В них уже имеются антикоагулянты и метки до которых следует набирать кровь.


Методика получения плазмы

Приготовление плазмы

Венозную кровь, полученную с антикоагулянтом немедленно после взятия перемешивают переворачиванием пробирок с кровью, закрытых крышками, не менее 5 раз. Перемешивание должно осуществляться без встряхивания и пенообразования. Время между началом наложения жгута и смешиванием крови с антикоагулянтом не должно превышать 2 минут.
После уравновешивания пробирок с кровью, их центрифугируют при RCF 1000-1200 xg, но не более 1500 xg, в течение 10-15 минут. Плазму немедленно сливают в транспортную центрифужную или химическую пробирку. Пробирку закрывают крышкой.
Условия транспортировки плазмы крови
Правильно полученная и собранная плазма крови должна быть своевременно доставлена в лабораторию. При комнатной температуре время доставки не должно превышать 24 часа. Если доставка плазмы в лабораторию осуществляется в течение дня, то она хранится при температуре +4…+80С (в холодильнике) и далее в специальных транспортных контейнерах в ледяной бане доставляется в лабораторию. Для более длительного хранения плазма может быть заморожена при температуре –200С.
Правила транспортировки плазмы такие же как и венозной крови.


Источник: analyz24.ru

Получение крови.Небольшие количества крови у животных в основном берут из ушной раковины, для этого место взятия предварительно обрабатывают, выстригают или выбривают. Протирают тампоном смоченным спиртом 70%, после этого либо делают надрез сосуда, либо прокалывают вену иглой. Первую выступившую каплю снимают тампоном так как после обработки спиртом эритроциты в ней разрушаются. Затем по каплям кровь собирают в часовое стекло и сразу же набирают в пипетки для исследования. У человека берут кровь из среднего или безымянного пальца левой руки, предварительно протерев 70% спиртом. Большое количество крови у лошади, у КРС, у МРС берут кровь из ярёмной вены на границе верхней и средней трети шеи. Для этого на шее животного ниже места прокола накладывают жгут, чтобы вена наполнилась кровью, протирают её спиртом или настойкой йода, затем в вену под углом 45 градусов вводят стерильную острую иглу против тока крови по направлению к голове. Кровь собирают в пробирки или колбы. У свиней большие количества крови получают из хвоста. Для этого скальпелем отсекают около 1 см хвоста, собирают кровь в пробирки, затем кончик хвоста сдавливают резинкой или бинтом на 1-2 суток, рану тщательно дезинфицируют. У собаки большие количества крови получают из вены сафена (наружная поверхность бедра). У кроликов из ушной вены, у морских свинок из сердца, у кур из гребня или подкрановой вены.


Получение сыворотки крови.Для получения сыворотки крови она должна свернуться, для этого кровь собирают в чистые сухие пробирки, струю крови направляют по стенке пробирки, чтобы не образовалась пена, затем пробирки с кровью ставят в термостат на несколько часов для полного свёртывания, затем образовавшийся сгусток отделяют от стенок пробирки стеклянной палочкой: обводя вокруг сгустки, затем кровь отстаивают или центрифугируют, при этом сгусток уплотняется-ретракцияи из него выделяется сыворотка соломенно-жёлтого цвета.

Получение плазмы крови.Кровь нужно предохранить от свёртывания, то есть стабилизировать. Для стабилизации крови используют антикоагулянты. К ним относится лимоннокислый Na, щавелевокислый Na, гепарин. В пробирку помещают антикоагулянт, затем берут кровь. После взятия пробирку несколько раз аккуратно переворачивают для перемешивания. При отстаивании или центрифугировании, кровь разделяют на 2 слоя: Сверху желтоватая мутная жидкость-плазма, внизу тёмно-вишнёвого цвета слой эритроцитов, а на нём небольшой белый налёт лейкоцитов.


Сыворотка крови отличается от плазмы тем, что в ней отсутствует белок фибриноген, так как из него образуется не растворённый фибрин, который стал основой для тромба.

Для того чтобы из плазмы получить сыворотку, нужно из неё осадить белок фибриноген. Затем от центрифугировать и отстаивать в отдельную пробирку сыворотку. ТХУ-трихлоруксусная кислота.

Определение объёма соотношения между плазмой и форменными элементами крови-это показатель гематокрита.

В крови содержится 55-60 % плазмы 40-45 форменных элементов. Для определения показателя гематокрита используют стабилизированную кровь (с добавлением антикоагулянта). Немного стабилизированной крови помещают на часовое стекло. Берут 2 капиллярные пробирки. Оба капилляра заполняют кровью. Затем оба конца капилляра затыкают пластилином, затем помещают в специальную центрифугу и центрифугируется при режиме 3-4 тысяч оборотов в минуту 8-10 минут. Извлекают капилляры. Кровь в них разделяется на 2 слоя. От центра плазма, от периферии форменные элементы. Затем капилляры помещают в специальную рамку. Определяют количества плазмы в обоих капиллярах и берут среднюю величину.

Форменные элементы крови.

1. Эритроциты. Красные кровяные тельца у высших животных округлые, безъядерные, диаметром 5-6 макромеров, сверху покрыты белково-серозной оболочкой, внутри строма-она представлена гемоглобином. Гемоглобин-пигмент, который по структуре является сложным белком, состоящим из простого белка глобина и красящего вещества гема, который является простетической частью. Гемоглобин состоит из 4 перойдных колец в центре которых двухвалентное железо. На разрезе эритроцит имеет двояковогнутый диск для увеличения площади поверхности.


2. Лейкоциты-белые кровяные тельца, крупнее эритроцитов, содержит ядро, способны к самостоятельному передвижению как в кровеносном русле, так и за его пределами. По строению и воспроизведению окраски их делят на 2 группы: зернистые (гранулоциты) и не зернистые (агранулоциты). К зернистым относят базофилы, эозинофилы, нейтрофилы. Нейтрофилы по степени зрелости делят на юные, палочкоядерные и сегментоядерные.

Агранулоциты-лимфоциты (малые, средние, большие). Моноциты. У всех животных и человека преобладают сегментоядерные нейтрофилы и лимфоциты с разными вариациями.

Гемоглобин-сложный белок, который находится внутри эритроцитов и составляет его строму. Гемоглобин за счёт двухвалентного железа в составе гема может присоединять кислород-оксигемоглобин, это не прочное соединение, оно образуется в сосудах лёгких, отдаёт кислород в тканевую жидкость и восстанавливается. Соединение гемоглобина с углекислым газом-карбгемоглобин, оно образуется в тканях, транспортируется в лёгких. Карбгемоглобин легко отдаёт углекислый газ и присоединяет кислород.

Cito! – Быстро. Тройчатка экспресс анализа крови-это уровень гемоглобина, количество лейкоцитов в крови и скорость оседание эритроцитов. Для того чтобы определить уровень гемоглобина нужно разрушить эритроциты и выделить гемоглобин в раствор.


Физиологические соединения гемоглобина — это оксигемоглобин, карбгемоглобин, восстановленный. Патологических видов гемоглобина более 50-ти. Из них карбоксигемоглобин соединение гемоглобина с угарным газом, очень прочное соединение, метгемоглобин соединение, в котором железо меняет свою валентность и становится трёхвалентным и это также приводит к образованию очень прочных соединений.

СОЭ (скорость оседания эритроцитов).

Если взять кровь, стабилизированную лимоннокислым натрием и набрать её в капилляр, поставить капилляр вертикально, эритроциты начнут оседать, сверху будет оставаться плазма. Скорость оседания эритроцитов может быть различной. Это зависит от нескольких факторов, от вида животного. Самая высокая скорость оседания эритроцитов у лошади и составляет 64 ммч. У КРС и МРС, кроликов 0.5-1 ммч, собака 2.5 ммч, у свиньи 34 ммч, у человека 4-8 ммч. Кроме того у каждого индивидуума в течении жизни СОЭ может меняться. В физиологических условиях, то есть в норме СОЭ меняется не значительно, однако у женской особи во 2-ой половине беременности СОЭ значительно увеличивается. Чаще всего СОЭ ускоряется или замедляется при патологиях.

Например, СОЭ замедляется при сгущении крови, ускоряется при наличии в организме воспалительных процессов при которых образуются много защитных белков глобулинов, они адсорбируются на эритроцитах, понижая их поверхностный заряд и в столбике крови эритроциты будут оседать быстрее. СОЭ важный диагностический показатель и входит в тройчатку экспресс анализа крови.


Гемолиз эритроцитов.Это разрушение оболочки эритроцитов и выход гемоглобина в раствор. Различают несколько видов гемолиза:

1. Осмотический.

2. Химический.

3. Температурный.

4. Механический.

Осмотический гемолиз основан на том, что в гипотонических растворах эритроциты разрушаются в зависимости от их концентрации, причём эритроциты разных индивидуумов по-разному разрушаются в гипотонических растворах-это значит, что эритроциты обладают осмотической резистентностью-это способность эритроцитов противостоять пониженному осмотическому давлению.

Химический основан на разрушении эритроцитов под действием химических веществ (аммиак, дистиллированная вода, кислоты).

Температурный основан на разрушении эритроцитов после размораживания, предварительно замороженных эритроцитов. Механический при перемешивании.

Свёртывание крови.

Свёртывание крови — это защитная реакция организма, которая предохраняет его от кровопотерь. Свёртывание крови запускается при нарушении целостности сосудистой стенки, при механических или других повреждениях, или при появлении на сосудистой стенке шероховатостей. В крови есть вещества 3 категорий, которые участвуют в свёртывании крови:

1. Вещества, способствующие свёртыванию. Они объединяются в свёртывающуюся систему крови.

2. Вещества, препятствующие свёртыванию крови. Они объединились в противсвёртывающую систему.

3. Система веществ, обуславливающих разжижение уже свернувшейся крови-это фибринолитическая система.

Свёртывание крови складывается из взаимодействия их компонентов:

1. Гемостаз-остановка кровотока.

2. Рефлекторное сужение повреждённых кровеносных сосудов вплоть до спазма.

3. Гуморальное сужение под действием гормонов и медиаторов адреналин, серотонин, норадреналин.

4. Агрегация (прилипание) тромбоцитов друг к другу и их повреждение.

 

 

Свёртывающая система крови.

Выделяют 13 факторов свёртывания:

I. Фибриноген-белок плазмы крови, который попадая в необычную среду превращается в нерастворимую фазу-фибрин.

II. Протромбин-неактивная форма фермента, который при определённых условиях превращается в активный тромбин.

III. Тромбопластин-фермент, выделяющийся из тромбоцитов и активирующий протромбин.

IV. Ионизированный кальций-участвует во всех фазах свёртывания, активирует все ферменты.

V. Акцелерин (Ас)- фермент, ускоряющий активацию тромбопластина.

VI.

VII. Проконвертин- сходен с 5 фактором, участвует в образовании тромбопластина.

VIII. Антигемофильный глобулин А. Участвуют в образовании

IX. Антигемофильный глобулин В. Тромбопластина.

X. Тромботропин плазмы – участвует в образовании тромба.

XI. Протромбопластин плазмы.

XII. Фактор Хагемана. Он активирует протромбопластин.

XIII. Фибринстабилизирующий фактор (ФСФ).

Свёртывание крови проходит в 3 фазы и представляет собой цепь ферментативных реакций. Результат каждой ферментативной реакции становится пусковым механизмом для следующей ферментативной реакции.

Цепи ферментативных реакций предшествует следующей реакции. Это рефлекторный спазм травмированного сосуда и образование «тромбоцитарного гвоздя». Его образование начинается с изменения заряда сосудистой стенки в месте повреждения. Возникает смена заряда. Это приводит к тому, что форменные элементы начинают скучиваться около повреждённого участка. Особая роль принадлежит тромбоцитам. Они скучиваются, слипаются между собой (агрегация), что приводит к первичному гемостазу. Агрегация тромбоцитов приводит к их нарушению. Из них выходят БАВ, которые запускают ферментативное свёртывание (коагуляционный гемостаз). В нём различают три фазы:

1. При разрушении тромбоцитов из них освобождается тромбопластин, который называется кровяной тромбопластин. Из повреждённой сосудистой стенки освобождается тканевой тромбопластин. В норме они в организме отсутствуют и выделяются только при повреждении стенки. При их участии образуется фермент-кровяная и тканевая протромбиназа. Это происходит под влиянием 5 8 9 10 и 11 факторов с участием ионов кальция.

2. Заключается в активации протромбина и превращению его в активный тромбин под влиянием 5 7 факторов и в присутствии ионов кальция.

3. Заключается в образовании фибрина. Идёт в 3 этапа:

a. Протеолитический этап. Тромбин действует на фибриноген, отщепляет от него отдельные мономеры, образуется профибрин.

b. Полимеризация. При участии кальция молекулы профибрина склеиваются. Образуется фибрин-полимер.

c. Под влиянием 8 фактора молекулы фибрин-полимера цементируются. Образуется окончательный фибрин. Он выпадает в виде нитей, в них запутываются форменные элементы, образуется сгусток.

Это не окончательный этап, так как через некоторое время начинается укорочение нитей фибрина, которое вызывает уплотнение сгустка и отжатие от него жидкости-сыворотки. Уплотнение сгустка ретракция-сложный биологический процесс, который приводит к плотному закрытию сосуда пробкой, края раны при этом сближаются. Фибриновая пробка со временем растворяется. Этот процесс-фибринолиз осуществляется под действием фибринолитической системы.

Источник: cyberpedia.su

Метод получения плазмы и сыворотки крови.

ПОЛУЧЕНИЕ ПЛАЗМЫ: Кровь кролика собирают в стеклянный стаканчик с 3,8р-ом цитрата натрия (соотношение консерванта и крови 1:9) . Кровь разливают в центрифужные пробирки уравновешивая их. Центрифугируют при 1000 об/мин 20мин. Плазму переносят в пенициллиновые флаконы и используют для дальнейших исследований. ПОЛУЧЕНИЕ СЫВОРОТКИ :Кровь кролика собирают в несколько центрифужных пробирок и перемешивают пастеровской пипеткой …Процедуру периодически повторяют. Ставят пробирки в холодильник на 1 час при температуре 4 градуса. уравновешивают пробирки и цетрифугируют 20мин при 1000 об/мин. Сыворотку крови переносят в пенициллиновые флаконы.22:48:38

Методы подсчета эритроцитов с использованием счетной камеры Горяева.

Берут заполненный меланжер для эритроцитов , зажав его концы 3 и 1пальцами , в течение одной минуты встряхивают. После тщательного перемешивания , выпустив предварительно наружу 1-2капли, наносят небольшую капельку на сетку камеры, предварительно путем притирания плотно закрытую покровным стеклышком . Излишки р-а при этом стекают в желобки. Заполнив камеры, ставят ее под микроскоп. Если фор. эл-ты расположены равномерно, приступает к подсчету эритроцитов. Чтобы получить данные необходимо подсчитать число э. в пяти больших квадратах, расположенных в разных местах сетки, например: по диагонали.

Методы подсчета лейкоцитов с использованием камеры Горяева.

Берут заполненный меланжер для лейкоцитов, зажав его концы 3и 1 пальцами, в течение одной мин встряхивают его, после перемешивания ,выпустив предварительно наружу 1-2 капли крови наносят небольшую капельку на сетку камеры , предварительно путем притирания плотно закрытую покровным стеклышком . Излишки р-а стекают в желобки. Для получения результатов подсчет произв в 25 больших квадратах, что составляет 400мал.квадратиков.Формула для вычисления кол-ва лейкоцитов в 1мл крови. X=B*400*20 и это все разделить на 400, где x-искомое число лейкоцитов в 1мл крови, в число лейк в 20больших квадратах.

Определение кол-ва гемоглобина в крови методом Сали.

В среднюю пробирку наливают 0,1н р-р хлористо-водородной кислоты до метки. Пипеткой берут 20мм в кубе крови из пальца сразу выдувают кровь на дно пробирки, так, чтобы верхний слой к-ты оставался неокрашенным. Не вынимая пипетку споласкивают ее кислотой. После содержимое пробирки перемешивают ударяя пальцем по дну пробирки. Затем ставят в штатив на 5-10 мин. За это время гемоглобин полностью превращается в солянокислый гематин. Затем в пробирку добавляем по каплям дистил. воду , перемешивая р-р стеклянной палочкой, до тех пор пока цвет р-а не будет одинаков цветом стандарта. цифра , стоящая на уровне полученного р-а показывает содержание гемоглобина в испытуемой крови.

Определение кол-ва гемоглобина в крови, с помощью фотокалориметра.

Для опред. сод. гемоглобина кровь берут обычным способом из пальца и смешивают ее в пробирки с 4 мл р-а I. В эту пробирку добавляют 0,1 мл р-а III . Смесь перелив в кювету. Через 1-2 мин происходит гемолиз. Гальванометр соед со стабилизатором, а его вкл в сеть. Отмечают положение стрелки гольванометра, которое показывают отн.сод. гемоглобина в крови в % .на основании полученных данных, рассчитывают абсол. сод. гемоглобина в крови .

Определение гематокритного числа.

Кровь для анализа берут из пальца руки чел или проделывают работу с кровью кролика. Гематокритные капилляры промыв р-Ом цитрата натрия и заполн кровью. Цетрифугируют 30мин при3000 об/мин. При этом под действием центробежной силы фор. эл-ты смещаются к кроям капилляров. Ближе к оси центрифуги остается столбик плазмы.

 

Определение времени свертыв. крови.

Кровь для анализа берут из пальца руки чел. Набирают в капилляр 25-30 мл крови. Отмечают по секундомеру время. Держа капилляр двумя пальцами , покачивает его на 30-45 градусов в обе стороны. Свободное смещение крови показыв, что свертывание еще не наступило. Полное свертывание крови соответствует моменту полной остановки движения крови.

Определение цветового показателя крови.

Определив в крови содержание гемоглобина и кол-во э.высчитывают цветовой пок по формуле. ЦП= гемоглобин ,гр/л разделить на число э.в одном микролитре крови ( первые три цифры) это все * на 3. В одном мкл крови в норме сод.166* 10 в -6 гемоглобина . Следов, содержание гемоглобина в одном эритроците = 33*10 в -12 гр или 33пг. ЦП это соотн между кол.гемоглобина в крови и числом эритроцитов . ЦП позволяет оценить степень насыщения эритроцитов гемоглобина . При пат.состояниях ЦП может быть больше 1 или меньше 1.

9) приготовление мазка крови.
Взяв предметное стекло прикасаются его поверхностью капли крови. Предметное стекло держит в левой руке, а правой рукой представл шлифовальное стекло узким краем к стеклу с кровью слева от капли под углом 45 градусов и продвигают его вправо до соприкосновения его с кровью. Выжидают пока кровь расплывется по всему ребру шлифовального стекла и затем легким быстрым движением ведут его справа налево до тех пор пока не будет исчерпана вся капля . Капля крови должна быть небольшой.мазок должен помещаться на стекле, не доходя одного см до его края. Хорошо сделанный мазок тонок, имеет желтоватый цвет

10) определение лейкоцитарной формулы.
Процентное соотношение разл видов лейкоцитов , выявленных в мазке крови , опр-ся как лейкоцитарная формула.
Общее кол-во в 1 л. крови: 4-9 умножить на 10 в девятой .
Эозинофилы: 0,5-5.
Базофилы: 0-1.
Нейтрофилы: юные — 0-1; палочкаяд.-1-6; сегментояд.- 47-72.
Моноциты 3-11.
Лимфоциты — 19-37

Определение СОЭ.

Капилляр промывают 5%р-ром цитрата натрия. Затем набирают 50мл. цитрат натрия и выдувают его на часовое стекло. В этот же капилляр двукратно набирают кровь из пальца чел. Обе порции крови выпускают на часовое стекло, смешивая с имеющимся там цитратом натрия. Полученную смесь набирают в капилляр и ставят в штатив. Через час смотрим высоту в мм образовавшейся плазмы в капилляре. Его величина и явл. мерой СОЭ . В норме СОЭ сост. от 4 до 10 мм/ч

12) метод определения группы крови с исп гемаглютин.сывороток.

Предметное стекло помещают на белую бумагу и наносят по капле станд.сыворотки I,II,III групп , сод.соотв.агглютинины .
I-альфа и бетта; II-бетта и III-альфа. Переносим небольш.кол.крови в каплю сыворотки 1группы. Затем, такое же кол.крови переносят в сыворотку 2 группы. 3-юю каплю переносят в сыворотку 3-ей группы. Каждый раз тщательно размешиваем кровь в капле сыворотки пока смесь не примет равномерно розового цвета. Реакция агглютинации наступает через 1-5 мин. При наличии агглютинации капля становится прозрачной , а эритроциты склеиваются .
1. Отсутствие агглютинации говорит об отсутствие агглютиногенов, что явл св-Ом эритроцитов 1 группы.
2. Если агглют.произошла с сыв. первой и третьей групп, то э.исследуемой крови, содержат А-агглютиноген, следов эта кровь второй группы.
3. Если агглют.проищошла с сыв. первой и второй групп это говорит о наличии В-агглютиногена в эритроцитах-3 группа крови.
4. При наличии агглютинации сыв.второй и третьей групп эритроциты содержат А и В агглютиногены-4 группа крови.

13. Методика определения резус-антигена D универсальным реагентом анти- D.

На дно пробирки вносят 1 каплю стандартного реагента антнрезус;

добавляют каплю исследуемой крови (или эритроцитов);

содержимое пробирки перемешивают встряхиванием;

медленно поворачивают пробирку, наклоняя ее почти до горизонтали таким образом, чтобы содержимое растекалось по стенкам. Такое распределение крови по стенкам пробирки делает реакцию более выраженной; агглютинация наступает в течение первой минуты, но для образования устойчивого комплекса антиген-антитело и четко выраженной агглютинации, а также ввиду возможности замедленной реакции при наличии антигена D, контакт эритроцитов с реагентом при перевертывании следует проводить не менее 3 мин;

для исключении неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку добавляют 2-3 мл физиологического раствора и перемешивают, не взбалтывая, путем 2-3 -кратного перевертывания пробирки;

оценку производят визуально.

14) анализ ПСС. Опыт Станиуса.
Обездвиж.ляг избегая сил.кровотеч.обнаж.сердце и перевяз.первой лигатурой обе дуги аорты после чего перерез.их выше места перевязки. Подсчит.число сокращ.в одну мин. Запрокид.сердце и наход.границу синуса на его дорс.стороне. Пров.лигат.подвеноз.синус и на границе между син.и предс.делаем перевязку. ( первая лиг.станиуса) . Частота сокращ.венозн.синуса не меняется, а предс и желуд.останавл. Подсчит.число сокращ.венозного синуса. Если после первой лигатуры сокращ.предс и жел.не восстан.самост., то дел 2 перевяз. ( 2 лиг.станиуса) отдел предс от жел. Теперь, буд сокр веноз синус и жел. Частота сокращ его будет более редкой по отн к перв. Затем деляют 3 перевязку( 3 лиг.станиуса) отдел яя от всего сердца нижнюю треть жел. ( верхушку сердца) , кот перест.сокращ. Если отрезать верхушку сердца и поместить в каплю р-а Рингера , то нанося ей мех.раздраж.( укол иглой) можно наблюд ее способность сокращ.

Анализ ЭКГ.

Анализ сердечного ритма и проводимости:

1) оценка регулярности сердечных сокращений;

2) подсчет ЧСС;

3) определение источника возбуждения;

4) оценка функции проводимости.

II. Определение поворотов сердца вокруг переднезадней, продольной и поперечной осей:

1) определение положения электрической оси сердца во фронтальной плоскости;

2) определение поворотов сердца вокруг продольной оси;

3) определение поворотов сердца вокруг поперечной оси.

III. Анализ предсердного зубца Р.

IV. Анализ желудочкового комплекса QRST:

1) анализ комплекса QRS;

2) анализ сегмента RS–Т;

3) анализ зубца Т;

4) анализ интервала Q–Т.

V. Электрокардиографическое заключение.

Анализ регулярности сердечных сокращений

Регулярность сердечных сокращений оценивается при сравнении продолжительности интервалов R–R между последовательно зарегистрированными сердечными циклами. Интервал R–R обычно измеряется между вершинами зубцов R (или S).

Подсчет ЧСС.

При правильном ритме ЧСС определяют по формуле:

ЧСС=60/R–R

где 60 — число секунд в минуте, R–R — продолжительность интервала, выраженная в секундах.

Рефлекс Гольца.

Это уменьшение частоты сердечных сокращений или даже полная остановка сердца при раздражении механорецепторов органов брюшной полости или брюшины.

Рефлекс Ашнера-Даниини.

Глазосердечный рефлекс— уменьшение пульса на 4-8 сердечных сокращений в минуту при надавливании на глазные яблоки. Рефлекс обусловлен связями тройничного и блуждающего нервов парасимпатической нервной системы. Афферентные пути идут по глазничной ветви тройничного нерва, хотя обнаружены пути и по верхне- и нижнечелюстной ветвям.[1] Эти афферентные пути образуют синаптические связи с висцеральным двигательным ядром блуждающего нерва, расположенного в ретикулярной формации ствола мозга. Эфферентные пути в составе блуждающего нерва идут от сердечно-сосудистого центра продолговатого мозга к сердцу. Повышенная стимуляция этого центра приводит к подавлению функции синусового узла.[2] Этот рефлекс особенно выражен у новорождённых и детей. Его следует учитывать во время офтальмохирургической операции у детей, особенно при коррекции косоглазия.[3] Брадикардия, несинусовый ритм, асистолия и очень редко смерть[4] могут быть вызваны этим рефлексом.

Пневмотахометрия.

Это метод функционального исследования лёгких с оценкой проходимости бронхов по величине объёмной мощности вдоха и выдоха с помощью пневмотахометра.

Исследования пневмотахометрии дают возможность диагностировать наличие скрытых (ранних) нарушений бронхиальной проходимости, о чём свидетельствует снижение показателей пневмотахометрии по сравнению с нормой на 15%. Регистрация параметров воздушной струи вдыхаемого и выдыхаемого воздуха на протяжении дыхательного цикла проводится с помощью пневмотахографа.Пневмотахометрию используют также для оценки динамики течения бронхолёгочных заболеваний и более точного суждения об эффективности лечения.

Определение остроты зрения.

Для исследования остроты зрения используют специальные таблицы, содержащие буквы, цифры или значки различной величины, а для детей — рисунки. Их называют оптотипами. таблица имеет 12 рядов букв или знаков, величина которых постепенно уменьшается от верхнего ряда к нижнему. В построении таблицы использована десятичная система: при прочтении каждой последующей строчки острота зрения увеличивается на 0.1 Справа от каждой строчки указана острота зрения, которой соответствует распознавание букв в этом ряду. Слева против каждой строки указано то расстояние, с которого детали этих букв будут видны под углом зрения 1’, а вся буква- под углом зрения 5’. Так, при нормальном зрении, принятом за 1.0, верхняя строка будет видна с расстояния 50 м, десятая- с расстояния 5 м.

метод получения плазмы и сыворотки крови.

ПОЛУЧЕНИЕ ПЛАЗМЫ: Кровь кролика собирают в стеклянный стаканчик с 3,8р-ом цитрата натрия (соотношение консерванта и крови 1:9) . Кровь разливают в центрифужные пробирки уравновешивая их. Центрифугируют при 1000 об/мин 20мин. Плазму переносят в пенициллиновые флаконы и используют для дальнейших исследований. ПОЛУЧЕНИЕ СЫВОРОТКИ :Кровь кролика собирают в несколько центрифужных пробирок и перемешивают пастеровской пипеткой …Процедуру периодически повторяют. Ставят пробирки в холодильник на 1 час при температуре 4 градуса. уравновешивают пробирки и цетрифугируют 20мин при 1000 об/мин. Сыворотку крови переносят в пенициллиновые флаконы.22:48:38

Источник: lektsia.com

Состав

В сыворотке крови находится большое количество разных веществ, среди которых:

  • Креатинин, необходимый при энергетических процессах. По его уровню диагностируют патологии почек.
  • Калий, кальций, магний, железо, натрий, фосфор и т.д.
  • Ферменты.
  • Холестерин низкой и высокой плотности.
  • Питательные вещества (липиды, глюкоза).
  • Витамины.
  • Гормоны: пролактин, кортикотропин, адреналин, кортизол, инсулин, дофамин, прогестерон, тестостерон и другие.

Как проводится получение этих составляющих

При подготовке к извлечению плазмы гемы или сыворотки специалисты обращают особое внимание на состояние здоровья пациента, а также учитывается целый комплект обстоятельств, которые тем или иным способом могут оказать воздействие на результативность гематологических экспериментов. Негативно сказываются на изучении:

  • физическое перенапряжение;
  • эмоциональное перенапряжение;
  • прием препаратов, которые влияют на снижение количества жиров;
  • прием пищи незадолго до процедуры забора крови;
  • курение, прием алкоголя и прочее.

Зачастую используется метод набора венозной крови из локтевой вены. Обычно медики стараются избегать пунктирования вен в местах шрамов, гематом и вен, которые используются для вливания различных фармакологических растворов.

Способы извлечения сыворотки гемы базируются на использовании такого технического оснащения:

  • стеклянные мензурки для центрифуги (на 10-12 мл);
  • для отделения кровяного сгустка используются стеклянные стеки или Пастеровские трубочки с запаянными капиллярами на конце;
  • исследовательская центрифуга.

Для получения сыворотки крови венозную кровь помещают в стеклянную мензурку для центрифуги, где она выстаивается при комнатной температуре в течение 30 минут до окончательного формирования гомологического свертка. После мензурку открывают и обводят стеклянным стеком по ее внутренним стенкам для отделения сгущенной формации от бортика сосуда.

Далее производится слив уже только одной сыворотки в другую центрифугальную пробирку, которую размещают в центрифугу, где раствор разделяется на компоненты на протяжении 10 минут. После завершения данного процесса полученную сыворотку сливают во вторичные мензурки для транспортировки.

Плазма крови образуется в результате выделения кровяных клеток. Плазма – это бесклеточная осадочная жидкость, которая оседает после центрифугирования гемы. Интересно, что в плазме и сыворотке крови содержится около 90-93% воды, а в самой крови – до 82% воды. Именно этот фактор имеет первостепенное исследовательское значение при любом лабораторном изучении.

Как выделяют

Сыворотку крови можно получить двумя способами:

  1. В результате естественного свертывания крови вне человеческого организма, во время которого происходит образование тромба и отделение жидкой составляющей. Сначала кровь 30 минут отстаивается, затем из нее удаляют сгусток крови, а жидкую часть помещают на десять минут в центрифугу.
  2. Путем воздействия на фибриноген ионами кальция. Этот процесс освобождения плазмы от фибриногена называется дефибринированием.

Способы получения плазмы и сыворотки крови
Состав цельной крови

Что такое плазма?

Плазма – это однородная цельная жидкость нежно-желтого цвета. Представляет собой жидкую часть крови после того, как из нее удалили все форменные элементы (клетки). Обычно плазма прозрачная, но после приема жирной пищи приобретает мутный осадок. Увидеть ее в свободном виде можно при условии, что кровь налить в пробирку и дать время отстояться. Вниз осядут форменные элементы крови, сверху останется плазма.

Важно! Иногда ситуация обстоит так, что при переливании крови используется исключительно плазма. Чаще всего это происходит в случае несовпадения группы крови донора и реципиента.

Фракция плазмы может понадобиться для исследования на онкомаркеры, чтобы выявить опухолевые образования и их характер (доброкачественные или рак). Это предельно важно в ранней диагностике некоторых онкологических заболеваний и в отслеживании эффективность проводимого лечения.

Для чего нужна

Сыворотку из плазмы выделяют в следующих случаях:

  • для биохимического анализа крови;
  • с целью выявления в организме возбудителя инфекции;
  • для оценки эффективности вакцины;
  • для изготовления сывороточного препарата индивидуального назначения.

Сыворотка отличается стабильностью, при этом в ней сохраняется большая часть антител.

В медицине она широко применяется для изготовления лекарственных средств от многих инфекционных болезней, таких как грипп, столбняк, дифтерия, коклюш, тиф, малярия, а также при отравлении ядами змей, насекомых и токсинами ботулизма.

Специальные меченые сыворотки (ферментами, радионуклидами, люминофорами) используют в диагностических целях и в научно-исследовательской деятельности).

Сыворотка крови считается самым распространенным реактивом при проведении биохимии крови, которая позволяет оценить эффективность обменных процессов в организме и работу его систем.

Выделяют два типа сывороточных реакций:

  • прямые (двухкомпонентые): осаждения, склеивания и выпадения в осадок и другие;
  • косвенные (трехкомпонентные): микробной нейтрализации, торможения склеивания эритроцитов и другие.

Выделение плазмы или сыворотки

Способы получения плазмы и сыворотки крови

Выделенная плазма (сверху)

Цельная кровь, как венозная, так и капиллярная, используется при проведении биохимических исследований (определение концентрации электролитов в эритроцитах, уровня глюкозы и показателей КЩР), а также гематологии (стандартный клинический анализ, проверка на малярию, проверка гематокрита и LE-клеток). Радиоиммунные и иммуноферментные методы предусматривают выделение плазмы или сыворотки.

Среди специалистов не сформировано единого мнения по поводу того, что лучше подходит для анализа – сыворотка или плазма. Например, для биохимического исследования чаще берут сыворотку венозной крови. Аргументами «за» в таких случаях выступает тот факт, что стероиды в этом случае экстрагируются легче и полнее. Также отмечается, что плазма чаще образует эмульсию с органическими растворителями, а при оттаивании после заморозки в ней могут появляться фибриновые хлопья.

Также при выборе конкретного материала следует принимать во внимание следующие объективные факторы:

  1. При выделении сыворотки существует опасность, что в процессе отстаивания крови из эритроцитов активно выделяются протеолитические ферменты, способные разрушить определяемое вещество, а также повредить его меченый аналог при инкубировании. С учетом данного момента рекомендуется готовить плазму для определения концентрации белковых соединений.
  2. Получение плазмы часто предусматривает применение цитрата или гепарина. Первый оказывает существенное влияние на кислотность среды, к чему весьма чувствительны отдельные вещества, а второй препятствует связыванию антигена с антителом. Чтобы избежать негативного влияния, в сухую пробирку, в которой будет производиться центрифугирование, стоит добавить 50 мг этилендиаминтетрауксусной кислоты на 5 мл крови. Сразу после забора кровь перемешивается с ЭДТА для получения смеси в пропорции 1:100. Кислота является блокатором протеолитических ферментов, слабым антикоагулянтом, а также входит в состав различных буферных смесей.

Для чего делают анализ сыворотки

Этот анализ необходим для определения уровня гормонов, белков иммуноглобулинов, иммунных комплексов, ферментов, а также таких минералов, как железо, кальций, калий, магний и других. Выявление неспецифических ферментов, которых в крови быть не должно, помогает диагностировать целый ряд патологий следующих органов:

  • поджелудочной железы;
  • скелетных мышц;
  • предстательной железы;
  • костной ткани;
  • желчевыводящих путей;
  • печени.

Анализ крови

Во время лабораторного исследования в первую очередь изучают белковый состав сыворотки: общий уровень альбуминов и глобулинов и их соотношение

Повышенное содержание протеинов может свидетельствовать о нарушении свертываемости крови, недавней вакцинации, обезвоживании, злокачественных опухолях. Если белков мало, это признак соблюдения безбелковой диеты, голодания, нарушения процесса производства белков, болезней почек и печени, эндокринных патологий, кровотечений, рака.

Кроме этого, определяют содержание конкретных видов белков. Например, по уровню сложного белка ферритина, отвечающего за хранение и транспортировку железа, определяют, сколько последнего содержится в организме.

По количеству в сыворотке неоптерина – метаболита нуклеиновых оснований – определяют, есть ли иммунный ответ и насколько быстро он появляется при инфекциях, опухолях и других поражениях.

Как получают сыворотку крови?

Для изучения состояния организма необходимо получить плазму, для чего кровь забирают из вены. Перед проведением процедуры пациенту рекомендована специальная диета с пониженным содержанием жиров. Также необходимо отказаться от употребления алкоголя, никотина и медицинских препаратов, способных повлиять на результаты.

Материал помещают в специальные контейнеры, после чего производят его обработку. Затем осуществляется очищение плазмы от форменных частиц и фибриногена.

Благодаря этому, у сыворотки появляется возможность длительного хранения, что позволяет ее активно исследовать и применять для лечения.

Сыворотка в своем составе содержит следующие элементы:

  1. Креатинин, отвечающий за работу почек.
  2. Ферменты.
  3. Хороший и плохой холестерин.
  4. Питательные вещества.
  5. Витамины.
  6. Гормоны.

Они позволяют проводить исследование общего состояния здоровья, выявлять различные патологии на начальном уровне. Если при взятии анализа лаборант проявил неосторожность, то возможно разрушение эритроцитов. Они окрасят сыворотку в розовый цвет, что сделает ее непригодной для изучения.

Также ложные результаты получаются при длительном голодании, пристрастии к безбелковым диетам и злоупотреблении жирной пищей.

Если забор крови произведен правильно, специалист определяет, как получить сыворотку:

  1. За счет применения ионов кальция.
  2. Путем натурального свертывания крови.

В сыворотке содержится больше всего антител, что позволяет ее использовать в различных целях:

  • Проведение биохимического анализа.
  • Для определения вида возбудителя при инфекционных заболеваниях.
  • Для получения индивидуальной лечебной сыворотки.
  • Проверки эффективности проведенной вакцинации.

Она дольше хранится, чем отличается от плазмы. Благодаря этой возможности, сыворотку подвергают длительной консервации, чтобы проверить на наличие возбудителей. Такие меры позволяют исключить вливание зараженного материала больным.

Способы получения плазмы и сыворотки крови
Как получить сыворотку

Отличие от плазмы крови

Ознакомьтесь со статьей:Особенности состава крови у детей

Считать, что плазма крови и сыворотка – одно и то же, неверно. Кратко сформулировать основные различия можно следующим образом:

  • плазма – это цельный компонент крови, сыворотка – часть плазмы;
  • в плазме находится нерастворимый белок фибриноген, сыворотка его лишена;
  • плазма всегда имеет желтоватый оттенок, сыворотка может быть красноватой;
  • плазма свертывается, если в ней есть коагулаза – фермент, выделяемый некоторыми болезнетворными микробами, а сыворотка – нет.

Получение крови для лабораторных исследований

Отобранный образец крови должен быть доставлен в лабораторию и обработан или подвергнут анализу в кратчайшие сроки. Продолжительное нахождение сыворотки над эритроцитами способно приводить к изменению концентрации компонентов и, соответственно, искажению результатов. Также необходимо учитывать, что период биологического полураспада ряда исследуемых веществ при нахождении образца под воздействием комнатной температуры крайне непродолжительный.

Медицинская центрифуга PrO-Hospital GP6

Медицинская центрифуга PrO-Hospital GP6

На первом этапе обработки с помощью сухой чистой стеклянной палочки производится аккуратное отделение сгустка крови от стенок пробирки и взвешивание емкости. Затем образец помещается в центрифугу для медицинских учреждений, работающую в подходящем скоростном диапазоне. В большинстве случаев обработку образцов крови при подготовке к исследованиям рекомендуется проводить при температуре 4°С, скорости вращения 1500 – 3000 об/мин, перегрузках от 500 до 1000g в течение 15-20 минут. Более высокая скорость вращения ротора может привести к гемолизу плазмы или сыворотки.

Выделенную сыворотку или плазму следует оперативно отделить от других элементов крови, после чего плотно закрыть пробирки крышками. Испорченные образцы подлежат утилизации.

Исследования крови следует проводить при одинаковых условиях. Таковые обеспечиваются при взятии крови утором, за 2-3 часа до кормления животных. У крупных сельскохозяйственных животных кровь берут в стоячем положении, в специальном станке или в стойле.

Беспокойных животных фиксируют на месте с помощью закруток и носовых зажимов, а пугливым животным завязывают глаза. У мелких животных взятие крови лучше производить, привязав их к столу или специальному станку. Для фиксации птиц разработаны специальные приспособления и столики. Для фиксации кур и уток предназначено устройство УФКУ-1.

Оно состоит из металлического корпуса, в дне которого имеются пазы для фиксации крыльев, а на бортах вырезаны полукруглые желоба для фиксации ног с помощью планок и крючков. Птицу кладут на дно корпуса в спинном положении. Аналогичное устройство (СРФ-1) несколько больших размеров применяют для фиксации гусей и индеек.

Оно выполнено в виде переносного стола на раздвижных опорах, который легко можно использовать в полевых условиях. При взятии крови из сердца птицу фиксируют на столе в спинном положении. В одну руку забирают обе ноги и оба крыла, а второй рукой берут голову и опускают ее ниже края стола. В таком положении птица находиться неподвижно, а зоб не мешает взятию крови.

На участке кожи, где предполагается произвести взятие крови, обязательно выстригают шерсть, кожу очищают спиртом или эфиром и насухо вытирают.

Следует всегда обращать внимание на то, чтобы кровь для исследования употреблялась только жидкая, свежевыпущенная, При взятии крови место укола нельзя сжимать и сдавливать, в противном случае в вытекающую кровь попадает тканевая жидкость, влияющая на показания исследования.

Повторное взятие крови для исследования из тех мест, где ранее уже бралась кровь, не рекомендуется. В случаях, когда получение крови из укола или разреза кожи затруднено вследствие плохого её вытекания, следует новое место разреза натереть эфиром или ксилолом и высушить ватой. После указанной манипуляции почти всегда удаётся получить кровь.

Небольшое количество крови у лошадей и крупного рогатого скота берут из вены угла глаза. Для этого нажатием пальца кровь задерживают в вене, которую прокалывают иглой. Обычно же кровь у крупного рогатого скота, свиней, коз, овец, собак, кошек берут из сосудов внутренней или наружной поверхности уха при помощи небольшого разреза скальпелем.

Получение крови возможно также путём надреза края уха. У кроликов кровь получают из ушной вены, у морских свинок — из сердца, иглами соответствующего диаметра и длины. У крупного рогатого скота кровь можно взять также из разреза ножницами хвостовой складки. У верблюдов кровь берут из разреза или прокола кожи на горбе. У крыс и мышей кровь получают из хвоста, отрезая кончик его, после предварительного очищения и нагревания компрессом до°С.

У птиц кровь получают из кожного разреза на гребне или берут из V. cutanea ulnaris или a. brachialis. Для этого на внутренней стороне крыла, над локтевым сочленением удаляют несколько перьев и слегка надрезают сосуд скальпелем или маленькими ножницами. Кровь у гусей берут из крыловой вены. Она расположена с внутренней стороны крыла и идет вдоль плечевой кости.

Она хорошо заметна, так как является самым крупным сосудом в этой области. При фиксации птицу держат жестко за ноги, заворачивая голову за одно крыло и оттягивают другое крыло. Место взятия крови ближе к локтевому суставу, очищается от пуха, кожу дезинфицируют спиртом, и прокалывают вену, направляя иглу вдоль вены срезом вверх.

Кровь легко стекает. Место укола тампонируется. Недостатком этого метода может является обильное кровотечение, которое бывает трудно остановить, особенно при высокой окружающей температуре. В области плеча, в месте расположения вены, подкожная клетчатка довольно рыхлая, что способствует легкому развитию гематом.

Для получения больших количеств крови прибегают к пункции вен. У лошадей, крупного рогатого скота, коз, овец и верблюдов кровь берут из яремной вены. На месте, где предполагается произвести прокол, выстригают шерсть и кожу дезинфицируют спиртом или 5%-ным раствором йода. Кровопускательную иглу предварительно кипятят в течение 5-10 минут.

Для взятия крови большим пальцем левой руки нажимают на вену у основания, с левой стороны шеи. Задержка оттока крови вызывает набухание вены. Набухшая вена видна в виде толстого шнура. Кровопускательную иглу берут в правую руку, вводят под острым углом по направлению к голове и продвигают в полость сосуда.

У свиней в больших количествах кровь получают из хвоста, отрезая его кончик.

У птицы кровь в больших объемах берется из сердца. Получить кровь из сердца несколько сложнее, чем из гребня и из вены, и для этого необходим определенный навык. Кровь из сердца берут шприцем на 10 или 20 см3 с помощью толстой или тонкой иглы. Большим пальцем левой руки нащупывают углубление около краниальной части грудной кости, под углом 45° прокалывают иглой кожу и лежащие под ней ткани, попадая в грудобрюшную область.

Порядок взятия крови для исследования должен быть следующим: стирают первую каплю, затем набирают кровь в капилляр для определения гемоглобина; далее берут кровь в смеситель для подсчёта лейкоцитов, потому что требуется сравнительно большое количество крови, затем в смеситель для подсчёта эритроцитов и, наконец, на предметных стёклах делают мазки и толстую каплю. После каждой манипуляции остатки крови стирают ватой.

Если взятие крови происходит одновременно у нескольких животных, то удобно пользоваться фотографическими ванночками или фанерой с укреплением меланжеров и стёкол, разложенных на каждое животное.

Цельная кровь, вышедшая из кровеносных сосудов, обладает способностью быстро сворачиваться, поэтому её необходимо стабилизировать антикоагулянтам. В настоящее время один из лучших антикоагулянтов — гепарин, так как использование других антикоагулянтов приводит к некоторому разбавлению крови, что в дальнейшем приходиться учитывать при проведении исследований.

READ Вегенера гранулематоз

Работая с цельной кровью, следует учитывать, что это живая ткань и в ней обязательно происходят — пусть и не столь интенсивно, как в организме, процессы обмена. Поэтому все гематологические исследования, проводимые с использованием цельной крови, должны проводиться в минимально короткие сроки. Стабилизированная кровь после длительного отстаивания или центрифугирования разделяется на форменные элементы (внизу пробирки) и плазму (вверху).

Сыворотка — жидкая часть крови, остающаяся после удаления из нее форменных элементов и белка фибрина. Она используется в биохимических и серологических исследованиях. Для получения сыворотки кровь берут в стерильные пробирки, вымытые в растворе мыла и промытые дистиллированной водой. Сыворотка лучше отделяется, если перед взятием крови стенки пробирок смочить теплым физиологическим раствором.

Пробирки должны иметь комнатную температуру, так как кровь плотно пристает к стенкам пробирок и наступает частичный гемолиз эритроцитов. Кровь ставят в термостат при температуре 35°С на 1 час. Затем переносят ее на холод. Через 4 часа сыворотка в виде прозрачной жидкости отделяется от кровяного сгустка.

Для взятия крови на сыворотку у птицы используются узкие пробирки, так как в отличие от других млекопитающих, у них ретракция кровяного сгустка относительно мала, и сыворотка отделяется в небольших количествах. После взятия крови пробирки наклоняют под углом 60 градусов. При вертикальном положении пробирок сыворотка отделяется значительно хуже.

В сыворотке содержится много различных органических соединений, поэтому ее, так же, как и цельную кровь, желательно исследовать сразу после получения. При необходимости более длительного хранения сыворотки ее можно консервировать. В качестве консервантов применяют мартиолят, тимол, борную кислоту и другие вещества.

3.1 Общие положения

Иммунные сыворотки

Их основой является иммуноглобулин Ig. Другие названия – антисыворотки и иммунобиопрепараты. Применяются для предупреждения и лечения инфекций. Их действие заключается в том, что находящиеся в их составе антитела вступают в реакцию с ядами или возбудителями болезней, в итоге происходит образование иммунных комплексов, которые затем удаляются с помощью фагоцитов и путем активации системы комплемента (комплекса сложных белков, находящихся в крови). Они позволяют сформировать у человека пассивный иммунитет и тем самым нейтрализуют болезнетворных микроорганизмов и токсины.

Виды

Антисыворотки делятся на два вида:

  • Гомологичная. Её получают из крови человека. Обычно используется плазма доноров, прошедших вакцинацию; кровь людей, переболевших определенными инфекционными болезнями; плацентарная и абортивная кровь.
  • Гетерогенная. Такие сыворотки делают из крови животных.

Порядок получения антисыворотки

  1. Проведение курса гипериммунизации человека или животного. Через определенные промежутки времени вводятся нарастающие дозы антигенов.
  2. Получение сыворотки путем естественного свертывания крови.
  3. Щадящее очищение (методом антигенного извлечения или методом ферментолиза).
  4. Выделение и концентрация иммуноглобулинов. Гетерогенную сыворотку получают путем спиртового фракцирования.

Способы получения плазмы и сыворотки крови
Иммунные сыворотки – незаменимая помощь при некоторых инфекционных заболеваниях, например, столбняк

Самая эффективная получается при использовании метода антигенного извлечения после ферментолиза иммуноглобулинов. Такая сыворотка содержит до 95 % антитоксинов и дает лучшие результаты при использовании. Считается, что она в несколько раз эффективнее очищенных другими способами.

Применение

Иммунные сыворотки сегодня широко применяются в целях профилактики и терапии инфекционных поражений: гриппа, дифтерии, столбняка, кори и других. При диагностике они позволяют определить вид, подвид, серотип возбудителя болезни, что помогает точно поставить диагноз и выбрать метод терапии.

Для обезвреживания яда змей, скорпионов, токсинов ботулизма существуют специальные сыворотки. После укуса собаки человеку назначают сыворотку в целях предупреждения бешенства.

Чем отличается от вакцины

Главное ее отличие от вакцины заключается в том, что она действует намного быстрее и уже через несколько часов у человека наблюдается улучшение. Это важно в случае, если заболевание имеет быстрое развитие. Но действуют они недолго: гомологическая – до пяти недель, гетерогенная – до трех недель, в то время как вакцина имеет более длительный срок действия.

Иммунная сыворотка
Сыворотка позволяет в кратчайшие сроки остановить и ликвидировать возбудителя инфекции

Сыворотки профилактические

Лечебно-профилактические сыворотки, в зависимости от применения, делят на три вида:

  • Противовирусные (грипп, корь).
  • Противобактериальные (чума, тиф, дизентерия).
  • Антитоксические (ботулизм, гангрена, столбняк).

Рекомендуемые анализы и их интерпретация

биоматериал сыворотка это что

ИФА — современный лабораторный анализ, который помогает выявить специфические антитела в крови к определенным заболеваниям. Метод отличается высокой специфичностью и чувствительностью. Из следующей статьи вы узнаете особенности проведения ИФА, а также о том, как можно расшифровать результат данного анализа. Иммуноферментный анализ проводят когда возникают сложности с постановкой диагноза, если у больного есть наследственная предрасположенность к некоторым заболеваниям, для того чтобы оценить эффективность лечения. Анализ выявляет характерные для определенных возбудителей антигены и антитела к ним.

Переоценить роль лимфоцитов при постановке диагноза и для защиты человека весьма трудно. Это один из первых показателей, реагирующий на инфекционное заражение, развитие злокачественного новообразования, аллергию или негативное влияние лекарственных препаратов.

Сывороточное железо и его норма

Плазму наполняют белки, которые переносят необходимые вещества, не растворяемые кровью. За транспортировку железа отвечает трансферрин. При помощи биохимического анализа можно определить этот комплекс, а также необходимые показатели.

Как правило, атомы железа содержит гемоглобин. После того как срок службы клеток заканчивается, они распадаются, выделяется достаточное количество железа. Весь процесс происходит в селезенке. Чтобы эти ценные микроэлементы перенести туда, где происходит образование новых эритроцитов, необходима помощь тех же самых белков — трансферрина.

Именно так атомы смешиваются с плазмой. Норма железа в сыворотке крови колеблется от 11,64 до 30,43 мкмоль/л. Это нормальные показатели для мужчин. У женщин норма железа составляет от 8,95 до 30,43 мкмоль/л.

Если показатели падают, значит, этого элемента не хватает. Для этого могут быть различные причины. Например, нарушения в рационе или недостаточное всасывание железа пищеварительной системой. Как правило, такое часто встречается при атрофическом гастрите. Повышение показателей также говорит о том, что в организме человека происходят патологические процессы.

Источник: ukb1.ru


Leave a Comment

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Этот сайт использует Akismet для борьбы со спамом. Узнайте, как обрабатываются ваши данные комментариев.