Подсчет ретикулоцитов в мазке крови

Подсчет ретикулоцитов в мазке после окраски их специальными красителями является на практике наиболее используемым методом подсчета количества ретикулоцитов. Это связано с тем, что метод простой, достаточно дешевый и не требует специального дорогостоящего оборудования, в связи с чем может применяться в любой клинико-диагностической лаборатории.

см. также статьи Ретикулоциты и Подсчет количества ретикулоцитов при помощи люминесцентной микроскопии

Принцип метода

Выявление зернисто-сетчатой субстанции ретикулоцитов при суправитальной окраске щелочными красками с дальнейшим подсчетом их в мазке крови.

Реактивы

Можно использовать один из следующих красителей:

1. Насыщенный раствор бриллиантового крезилового синего в абсолютном спирте (для приготовления абсолютного спирта надо выдержать 96% этанол в нескольких сменах прокаленного порошка медного купороса). На 100 мл абсолютного спирта берут 1,2 г краски.


2. Раствор азура I: азур I – 1 г, аммония оксалат – 0,4 г, натрия хлорид – 0,8 г, этиловый спирт 96% — 10 мл, дистиллированная вода – 90 мл. Раствор краски в закрытом флаконе помещают на 2 – 3 дня в термостат при 37° C и периодически энергично взбалтывают. Затем охлаждают до комнатной температуры и фильтруют через бумажный фильтр. Раствор сохраняют в посуде из темного стекла. При появлении осадка краску следует снова профильтровать.
3. Раствор азура II: азур II – 1 г, натрия цитрат – 5 г, натрия хлорид – 0,4 г, дистиллированная вода – 45 мл. Раствор оставляют в термостат при 37° C на 2 суток, периодически помешивая. Для ускорения растворения краску можно прогреть на слабом огне в течение 15 – 20 мин, не доводя до кипения. Охлаждают до комнатной температуры и фильтруют. Хранят в посуде из темного стекла.

Специальное оборудование

Микроскоп.

Ход определения

Окраску ретикулоцитов проводят либо на стекле, либо в пробирке.

Окраска ретикулоцитов на стекле

При окраске ретикулоцитов на стекле хорошо вымытое и обезжиренное предметное стекло подогревают над пламенем горелки. Стеклянной палочкой наносят на стекло каплю одного из перечисленных выше красителей и готовят мазок из краски шлифованным стеклом. Стеклографом маркируют сторону стекла, на которую нанесен мазок краски. В таком виде стекла можно заготовить впрок и хранить в сухом темном месте. Перед проведением анализа готовят влажную камеру. Обычно для этого пользуются чашкой Петри с уложенными по краям валиками смоченной ваты или фильтровальной бумаги. Наносят каплю крови на мазок краски, готовят из нее тонкий мазок и тотчас помещают во влажную камеру на 3 – 10 мин. Затем высушивают мазки на воздухе.

Окраска ретикулоцитов в пробирке

Окраска ретикулоцитов в пробирке отличается при использовании разных красителей.

Метод 1 – окраска ретикулоцитов в пробирке бриллиантовым крезиловым синим.

Перед употреблением готовят в пробирке рабочий раствор бриллиантового крезилового синего из расчета на каплю 1% раствора оксалата калия 4 капли раствора краски бриллиантового крезилового синего. В краску добавляют 0,04 мл крови (две пипетки до метки 0,02). Смесь тщательно, но осторожно перемешивают и оставляют на 30 минут. Затем снова перемешивают и готовят тонкие мазки.

Метод 2 — окраска ретикулоцитов в пробирке азуром II.

В пробирку помещают 0,05 мл раствора краски азур II и 0,2 мл крови. Смесь тщательно перемешивают и оставляют на 20 – 30 минут. Снова перемешивают и готовят тонкие мазки.

Метод 3 — окраска ретикулоцитов в пробирке азуром I.

В пробирку помещают 0,3 – 0,5 мл раствора краски азур I и 5 – 6 капель крови пипеткой от аппарата Панченкова. Пробирку закрывают резиновой пробкой, смесь тщательно, но осторожно перемешивают и оставляют на 1 – 1,5 часа (ретикулоциты окрашиваются лучше при экспозиции 1,5 – 3 часа). Перемешивают и готовят тонкие мазки.

В настоящее время в продаже имеются готовые красители для ретикулоцитов заводского изготовления. Окраска ретикулоцитов с их помощью производится согласно прилагаемой инструкции.

Подсчет ретикулоцитов.

Приготовленные одним из указанных выше способов мазки микроскопируют с иммерсионным объективом. В мазке ретикулоциты и эритроциты окрашены в желтовато-зеленоватый цвет, зернисто-нитчатая субстанция в ретикулоцитах – в синий (при окраске азуром II и бриллиантовым крезиловым синим) или синевато-фиолетовый цвет (при окраске азуром I).

Фотографии ретикулоцитов:

Окраска ретикулоцитов
Ретикулоциты
Ретикулоциты
Ретикулоциты
Reticulocytes

Находят поля зрения, где эритроциты располагаются раздельно. В этих полях зрения необходимо подсчитать не менее 1000 эритроцитов и отметить среди них количество эритроцитов, содержащих зернисто-нитчатую субстанцию. Большая точность получается при подсчете на 2000 – 3000 эритроцитов.

В связи с тем, что в поле зрения располагается большое количество эритроцитов, что затрудняет подсчет, необходимо ограничить (уменьшить) поле зрения. Для этого можно воспользоваться либо специальным окуляром, в котором можно уменьшить поле зрения до требуемых размеров, либо воспользоваться специальным «окошком» (из бумаги вырезают круг диаметром несколько меньше окуляра, в центре круга вырезают небольшой ромбик и вставляют полученное окошко в окуляр).

Количество подсчитанных ретикулоцитов выражают на 100 (в процентах) или на 1000 (в промилле) эритроцитов.

Пример: При подсчете в мазке 1000 эритроцитов выявлено, что 15 эритроцитов из 1000 имеют зернисто-сетчатую субстанцию той или иной степени, то есть являются ретикулоцитами. Следовательно, количество ретикулоцитов в данном случае составляет 1,5% или 15‰.

Клиническое значение определения количества ретикулоцитов.

Литература:

• Справочник «Лабораторные методы исследования в клинике» под редакцией Меньшикова В. В. — Москва, «Медицина», 1987 г
• Любина А. Я., Ильичева Л. П. и соавторы — «Клинические лабораторные исследования» — Москва, «Медицина», 1984 г.

Источник: www.clinlab.info

Принцип метода

Выявление зернисто-сетчатой субстанции ретикулоцитов при суправитальной окраске щелочными красками с дальнейшим подсчетом их в мазке крови.

Реактивы

Можно использовать один из следующих красителей:

1. Насыщенный раствор бриллиантового крезилового синего в абсолютном спирте (для приготовления абсолютного спирта надо выдержать 96% этанол в нескольких сменах прокаленного порошка медного купороса). На 100 мл абсолютного спирта берут 1,2 г краски.


2. Раствор азура I: азур I – 1 г, аммония оксалат – 0,4 г, натрия хлорид – 0,8 г, этиловый спирт 96% — 10 мл, дистиллированная вода – 90 мл. Раствор краски в закрытом флаконе помещают на 2 – 3 дня в термостат при 37° C и периодически энергично взбалтывают. Затем охлаждают до комнатной температуры и фильтруют через бумажный фильтр. Раствор сохраняют в посуде из темного стекла. При появлении осадка краску следует снова профильтровать.
3. Раствор азура II: азур II – 1 г, натрия цитрат – 5 г, натрия хлорид – 0,4 г, дистиллированная вода – 45 мл. Раствор оставляют в термостат при 37° C на 2 суток, периодически помешивая. Для ускорения растворения краску можно прогреть на слабом огне в течение 15 – 20 мин, не доводя до кипения. Охлаждают до комнатной температуры и фильтруют. Хранят в посуде из темного стекла.

Ход определения

Окраску ретикулоцитов проводят либо на стекле, либо в пробирке.

Окраска ретикулоцитов на стекле

При окраске ретикулоцитов на стекле хорошо вымытое и обезжиренное предметное стекло подогревают над пламенем горелки. Стеклянной палочкой наносят на стекло каплю одного из перечисленных выше красителей и готовят мазок из краски шлифованным стеклом. Стеклографом маркируют сторону стекла, на которую нанесен мазок краски. В таком виде стекла можно заготовить впрок и хранить в сухом темном месте. Перед проведением анализа готовят влажную камеру. Обычно для этого пользуются чашкой Петри с уложенными по краям валиками смоченной ваты или фильтровальной бумаги. Наносят каплю крови на мазок краски, готовят из нее тонкий мазок и тотчас помещают во влажную камеру на 3 – 10 мин. Затем высушивают мазки на воздухе.

Окраска ретикулоцитов в пробирке

Окраска ретикулоцитов в пробирке отличается при использовании разных красителей.

Метод 1 – окраска ретикулоцитов в пробирке бриллиантовым крезиловым синим.

Перед употреблением готовят в пробирке рабочий раствор бриллиантового крезилового синего из расчета на каплю 1% раствора оксалата калия 4 капли раствора краски бриллиантового крезилового синего. В краску добавляют 0,04 мл крови (две пипетки до метки 0,02). Смесь тщательно, но осторожно перемешивают и оставляют на 30 минут. Затем снова перемешивают и готовят тонкие мазки.

Метод 2 — окраска ретикулоцитов в пробирке азуром II.

В пробирку помещают 0,05 мл раствора краски азур II и 0,2 мл крови. Смесь тщательно перемешивают и оставляют на 20 – 30 минут. Снова перемешивают и готовят тонкие мазки.

Метод 3 — окраска ретикулоцитов в пробирке азуром I.

В пробирку помещают 0,3 – 0,5 мл раствора краски азур I и 5 – 6 капель крови пипеткой от аппарата Панченкова. Пробирку закрывают резиновой пробкой, смесь тщательно, но осторожно перемешивают и оставляют на 1 – 1,5 часа (ретикулоциты окрашиваются лучше при экспозиции 1,5 – 3 часа). Перемешивают и готовят тонкие мазки.

В настоящее время в продаже имеются готовые красители для ретикулоцитов заводского изготовления. Окраска ретикулоцитов с их помощью производится согласно прилагаемой инструкции.

Подсчет ретикулоцитов.

Приготовленные одним из указанных выше способов мазки микроскопируют с иммерсионным объективом. В мазке ретикулоциты и эритроциты окрашены в желтовато-зеленоватый цвет, зернисто-нитчатая субстанция в ретикулоцитах – в синий (при окраске азуром II и бриллиантовым крезиловым синим) или синевато-фиолетовый цвет (при окраске азуром I).

Фотографии ретикулоцитов:

Находят поля зрения, где эритроциты располагаются раздельно. В этих полях зрения необходимо подсчитать не менее 1000 эритроцитов и отметить среди них количество эритроцитов, содержащих зернисто-нитчатую субстанцию. Большая точность получается при подсчете на 2000 – 3000 эритроцитов.

В связи с тем, что в поле зрения располагается большое количество эритроцитов, что затрудняет подсчет, необходимо ограничить (уменьшить) поле зрения. Для этого можно воспользоваться либо специальным окуляром, в котором можно уменьшить поле зрения до требуемых размеров, либо воспользоваться специальным «окошком» (из бумаги вырезают круг диаметром несколько меньше окуляра, в центре круга вырезают небольшой ромбик и вставляют полученное окошко в окуляр).

Количество подсчитанных ретикулоцитов выражают на 100 (в процентах) или на 1000 (в промилле) эритроцитов.

Пример: При подсчете в мазке 1000 эритроцитов выявлено, что 15 эритроцитов из 1000 имеют зернисто-сетчатую субстанцию той или иной степени, то есть являются ретикулоцитами. Следовательно, количество ретикулоцитов в данном случае составляет 1,5% или 15‰.

Литература:

• Справочник "Лабораторные методы исследования в клинике" под редакцией Меньшикова В. В. — Москва, "Медицина", 1987 г
• Любина А. Я., Ильичева Л. П. и соавторы — "Клинические лабораторные исследования" — Москва, "Медицина", 1984 г.

Похожие статьи

Подсчет количества ретикулоцитов при помощи люминесцентной микроскопии

Метод подсчета количества ретикулоцитов при помощи люминесцентной микроскопии отличается простотой и требует немного времени, более точен по сравнению с обычным методом, так как при люминесцентной микроскопии обнаруживаются мельчайшие зерна сетчато-нитчатого вещества.

Раздел: Гемоцитология

Ретикулоциты

Ретикулоциты – молодые эритроциты, образующиеся после потери нормобластами ядер. Характерной особенностью ретикулоцитов является наличие в их цитоплазме зернисто-нитчатой субстанции (ретикулума), представляющей агрегированные рибосомы и митохондрии.

Раздел: Гемоцитология

Патологические включения в эритроцитах

Тельца Жолли (тельца Хауэлла-Жолли) — мелкие круглые фиолетово-красные включения размером 1 — 2 мкм, встречаются по 1 (реже по 2 — 3) в одном эритроците. Предсталяют собой остаток ядра после удаления его РЭС. Выявляются при интенсивном гемолизе и "прегрузке" РЭС, после спленэктомии, при мегалобластной анемии..

Раздел: Гемоцитология

Цитохимическое исследование липидов

Цитохимическое исследование липидов основано на применении красящих веществ, растворяющихся в жирах (судан III, судан IV, черный судан и др.). Для выявления нейтрального жира пользуются суданом III, окрашивающим жир в оранжевый цвет. Липоиды выявляются лучше суданом черным (черное окрашивание).

Раздел: Цитохимия

Анализ мочи по Нечипоренко

Метод Нечипоренко в отечественной лабораторной диагностике является наиболее распространенным методом количественного определения форменных элементов в моче. Этот метод наиболее прост, доступен любой лаборатории и удобен в амбулаторной практике, а также имеет ряд преимуществ перед другими известными количественными методами исследования осадка мочи. По методу Нечипоренко определяют количество форменных элементов (эритроцитов, лейкоцитов и цилиндров) в 1 мл мочи.

Раздел: Анализ мочи

Ретикулоцит — это предшественник красного кровяного тельца с остатком рибонуклеиновой кислоты, циркуляция происходит в периферии кровяной системы в небольших количествах. Образование этих клеток происходит из нормобласта в системе костного мозга, там они локализуются два дня.

Определение вещества

У ретикулоцитов такая же функциональность, как и у клеток эритроцита . Они отвечают за транспортировку кислорода. Нормы показателя данного вещества переменчивы, это происходит из-за возрастных изменений. В крови у женщин ретикулоцит — 0,12–2,05. У мужчин показатель ретикулоцита — 0,24–1,7. У детей норма — 0,2–0,7. К огда анализы ретикулоцитов отклонены от нормы, это свидетельствует о сбое в системе. Подготовка к проведению анализа на ретикулоциты — одна из главных основополагающих, так как если пациент неправильно подошел к сдаче крови, то может выявиться неточный результат. Чтобы анализ не был искажен, необходимо:

• проходить анализы утром (натощак);
• до проведения анализа за 9 часов не следует употреблять пищу, можно только пить воду, но не в больших количествах;
• за 14 дней до сдачи анализа на ретикулоциты необходимо отказаться от приема лекарственных препаратов, так как может повлиять на кровь;
• за два дня до сдачи крови нужно исключить из рациона употребление жирной пищи, алкоголя, выпечки.

Несоблюдение правил негативно скажется на результате анализа.

Отклонение от нормы

Трансформацию проводят, чтобы определить показатели уровней клеток, не входящих в клинические анализы. Данная процедура является дополнительной и назначают ее в том случае, если есть подозрение на какое-либо отклонение в системе. Количественный состав подсчитывают при помощи микроскопического обследования, когда берут мазок плазмы. Это является самым простым, доступным и малозатратным методом, который применяют в лабораторных условиях. Для проведения анализа необходимы красители, пробирки и стекло, микроскоп. Подсчеты ретикулоцитов проводят, исследуя готовые мазки при помощи микроскопа.

Клетки эритроцитов и ретикулоцитов характерны желтовато-зеленоватым окрасом. Обладают зернистой структурой и синим цветом.

Когда клетки подсчитывают, то их обозначают в промилле или в проценте. Когда уровень ретикулоцитов понижен, то это значит, что произошло нарушение в работе системы. Если произошло заболевание в почках, то показатель крови снижается незначительно. Резкие снижения свидетельствуют о том, что в системе образовалось заболевание с сопровождением быстрого разрушения клеток эритроцита. Данное проявление часто возникает при анемии, поэтому важно сдавать кровь для своевременной проверки.

Действие алкоголя на систему кроветворений оказывает негативное действие, при этом угнетается работа в системе костного мозга. После точного выявления состояния в организме, врач назначает дополнительные диагностики, а когда подтверждается результат, назначается лечение. Могут назначить цитостатики, антибиотики, противоэпилептические средства, а также иммунодепрессанты. При правильном приеме, а также использовании всех рекомендаций специалиста, наступает полное выздоровление. В результате восстанавливается вся работа в системе организма, ретикулоциты, здоровью человека ничего не угрожает, исследования крови показывают положительные результаты.

Причины понижения и повышения уровня клеток

Ретикулоцит повышается при метастазировании в системе костного мозга. Также образуется, когда в организме произошла гемолитическая анемия, талассемия. Когда в системе организма происходит кислородное голодание. Через 7 дней после лечения происходит усиление производства клеток, наблюдается переобразование в зрелый эритроцит. Кровопотеря в системе организма — одна из самых главных причин, по которым произошло такое повышение ретикулоцитов в крови.

Повысить уровень ретикулоцитов в системе организма помогают витамины группы В (неуробекс), препараты жаропонижающего действия (нурофен, итбупрофен, парацетамол), вещества эритропоэтинов, препараты железа (фенюльс, сорбифер, феррум-лек, фолиевая кислота, феримакс). Назначают прохождение анализа крови на ретикулоциты, когда необходимо проконтролировать лечение анемического состояния при помощи железосодержащих препаратов.

Высокий уровень веществ ретикулоцита выявляют у людей с применением эффективных диагностических мероприятий или профилактических методик, когда в организме прогрессирует фолиеводефицитная или железодефицитная анемия. Через неделю после того, как начали лечение в клеточном синтезе, где эритроцитный ряд, происходит повышение показателя для трансформации клеток в нормальный эритроцит.

Общие рекомендации и устранение заболеваний

Важно, чтобы специалист был уведомлен о том, что было кровотечение, это ему поможет в дальнейшем исключить повторение данного процесса. Когда пациенту не назначено комплексное лечение, а также в организме не происходили кровопотери, то проявление высокого показателя ретикулоцитов означает, что произошел ускоренный эритропоэз.

Повышение показателя ретикулоцитов происходит при малярии, талассемии, гемолитической анемии. У больных, страдающих онкозаболеванием происходит увеличение количества ретикулоцитов, когда произошел метастаз в системе костного мозга. Происходит при апластической, гипопластической и фолиеводефицитной анемии. Когда причина в таких образованиях, то анализ уровня ретикулоцитов иногда равен нулю.

Если у человека проблемы с почками и прогрессирует тяжелое заболевание, то это приводит к тому, что уменьшается уровень клетки ретикулоцита. Как только заболевание проходит и причины устраняются, уровень ретикулоцитов восстанавливается, анализы имеют положительные результаты. Анализы зачастую показывают незначительное понижение состава, и как только больной справляется с заболеванием, ретикулоциты нормализируются при повторной сдаче анализов. При чрезмерном употреблении алкогольных напитков происходит действие тройного эффекта, то есть истощается система в кроветворении. Под действием спирта угнетается работа в почках, токсические вещества попадают в кровяную систему, сдача анализа нежелательна.

Анализы у беременных практически всегда выявляют незначительные увеличения уровня ретикулоноцита в крови. Происходит из-за увеличения общего объема в кровяной системе. Диагностика значений ретикулоцита при обследовании крови состоит в оценке эффективности лечебных мероприятий. При сдаче анализа важно соблюдать все рекомендации врача для точного определения ретикулоцита.

Источник: serdce-help.ru

Прижизненная (суправитальная) окраска ретикулоцитов

Для этого способа необходимы следующие реактивы:

1. Абсолютный этиловый спирт: в сухую с притертой пробкой посуду помещают прокаленную безводную (белого цвета) сернокислую медь и приливают 1/4 часть абсолютного спирта. Содержимое взбалтывают. Абсолютный спирт (спирт, не содержащий воды) можно получить обезвоживая спирт сернокислой медью, предварительно прокаленной. Обезвоживание прекращают тогда, когда сернокислая медь перестает голубеть.
2. Насыщенный раствор бриллианткрезиловой синьки в абсолютном спирте: к 80 мл абсолютного спирта прибавляют 1 г бриллианткрезиловой синьки.
3. Азур I.

Техника прижизненной окраски и подсчета ретикулоцитов

Предметные стекла заранее покрывают насыщенным раствором бриллианткрезиловой синьки. Свежевыступившую каплю крови распределяют по предметному стеклу с краской, как при приготовлении мазка крови. Препарат немедленно помещают на 6-8 минут во влажную камеру, после чего высушивают на воздухе и микроскопируют (окуляр 7Х, объектив 90X с поднятым конденсором). Ретикулоциты подсчитывают точно так же, как тромбоциты, с ограничителем поля зрения. Ретикулоциты, окрашенные бриллианткрезиловой синькой, бледно-зеленые с сеточкой голубого или синего цвета (см. рис.).

Ретикулоциты, окрашенные бриллианткрезиловой синькой

Вместо бриллианткрезиловой синьки для окраски ре тикулоцитов можно использовать, согласно прописи Магиной, краску азур I (1 г азура I на 40 мл абсолютного спирта; выдерживают при комнатной температуре 2 дня).

Одновременная суправитальная окраска тромбоцитов и ретикулоцитов по Алексееву

Для этого способа применяют краску Алексеева. В колбу емкостью 100 мл насыпают 1 г краски азур II и добавляют приготовленный в отдельной колбе реактив следующего состава: 5 г лимоннокислого натрия, 4 г хлористого натрия и 45 мл дистиллированной воды. Содержимое колбы медленно нагревают на асбестовой сетке при постоянном помешивании, не доводя до кипения. Охлаждают, фильтруют. Фильтрат используют в качестве рабочего раствора краски.

Техника одновременной окраски и подсчета тромбоцитов и ретикулоцитов

В смеситель для лейкоцитов до метки 1,0 набирают краску Алексеева, вытирают кончик от краски и кладут на стол. Производят более глубокий, чем обычно, укол в палец. Кровь набирают до 4/5 объема расширенной части смесителя, следя за тем, чтобы в нее не попадали пузырьки воздуха. Кровь быстро выдувают из капиллярной части смесителя на ватку, а остальное содержимое — в луночку предметного стекла. С луночки жидкость вновь набирают в смеситель. Двух-, троекратным повторением этой манипуляции смешивают кровь с реактивом. Набрав последний раз жидкость в смеситель, его оставляют в горизонтальном положении на 15-30 минут для окрашивания ретикулоцитов и тромбоцитов. Затем смеситель встряхивают в течение минуты и выпускают 1-2 капли. Из последующих капель готовят тонкие мазки. Препараты высушивают на воздухе, фиксируют метиловым спиртом и докрашивают краской Романовского в разведении 1-2 капли на 1 мл воды в течение 35-45 минут. Краску смывают водой, а мазки высушивают и микроскопируют. В мазке, окрашенном по Алексееву, ретикулоциты розовые с сеточкой синего цвета (см. рис.), а тромбоциты голубовато-сиреневого цвета.

Ретикулоциты, окрашенные по Алексееву

Подсчет ретикулоцитов и тромбоцитов производят одновременно на 1000 эритроцитов так же, как описано в теме «Тромбоциты». Результаты для ретикулоцитов выражают в promille; тромбоциты рассчитывают на 1 мм3 крови (для расчета учитывают количество эритроцитов, подсчитанных у данного больного).

В крови здоровых лиц насчитывают 5-10 % ретикулоцитов.

Источник: ginekolog.my1.ru

Ретикулоциты— молодые эритроциты, обра­зующиеся после потери нормобластами ядер. Характерной особенностью ретикулоцитов явля­ется наличие в цитоплазме зернисто-нитчатой субстанции, представляющей агрегированные рибосомы и митохондрии. Эта субстанция выяв­ляется при специальном методе окраски — суправитальном (прижизненная), т. е. без предварительной фикса­ции клеток. Зернисто-нитчатая субстанция в различных ретикулоцитах отличается полимор­физмом; чем клетка моложе, тем субстанция более обильная. У самых молодых ретикуло­цитов она имеет форму густого клубка, у более зрелых клеток выявляется в виде сеточки, от­дельных нитей и затем отдельных зерен. В маз­ках, окрашенных обычными гематологическими методами, ретикулоциты серовато-розового цве­та — полихроматофильны, т. е. окрашены раз­ными красителями.

Определение количества ретикулоцитов про­изводится при микроскопии специально окра­шенных мазков

3.2.1 Методика окраски мазков крови на ретикулоциты по Алексееву (подсчет по Фонио)

Принцип: Метод основан на подсчете числа ретикулоцитов в окрашенных мазках крови на 1000 эритроцитов. Готовят одновременно 2 мазка (на тромбоциты и ретикулоциты).

Реактив:рабочий раствор краски по Алексееву

Оборудование: микроскоп

Ход определения: В капилляр для определения СОЭ набирают рабочий раствор до метки 0,75 мкл, и полный капилляр крови из прокола пальца больного . Соотношение красителя к крови составляет 1:4. Смесь оставляют на 2 часа, затем делают тонкий мазок на предметном стекле. Мазок высушивают на воздухе и микроскопируют с иммерсией.

Подсчет производят следующим образом: сетки ретикулоцитов окрашиваются в синий цвет. Во время подсчета эритроцитов в поле зрения считают количество ретикулоцитов. Подсчитывают 1000 эритроцитов. Результат выражают в процентах.

Нормативная величина:В крови здорового человека содержится 0,2-1,0 %

( или 2-10 даже допускается до 12 проммиль) ретикулоцитов

Клинико-диагностическое значение:Появление ретикулоцитов в периферической крови указывает на усиленную работу костного мозга и используется при оценке различных видов анемий.

Повышение количества ретикулоцитов наблюдается после кровопотери, при гемолитических анемиях

Резкий ретикулоцитоз — отмечается при гемолитической желтухе

Снижение количества ретикулоцитов при наличии анемии говорит об апластическом типе кроветворения.

По уровню ретикулоцитов в крови анемии подразделяются на:

— регенераторные( количество ретикулоцитов 0,5-5 %- это постгеморрагические анемии);

— гиперрегенераторные( количество ретикулоцитов более 5% — это гемолитические анемии);

— гипо — и арегенераторные( количество ретикулоцитов снижено или они отсутствуют, несмотря на тяжелое течение анемии- гипо — и апластические, железо- и. В 12- дефицитные анемии).

Внимание! Ретикулоцитоз при отсутствии анемии указывает на скрытые, но хорошо компенсированные кровопотери.

Источник: studopedia.ru

Что такое ретикулоциты (Reticulocytes)?

Ретикулоциты – молодые формы эритроцитов (предшественники зрелых эритроцитов), содержащие зернисто-нитчатую субстанцию, выявляемую при специальной (суправитальной) окраске. Ретикулоциты выявляются как в костном мозге, так и в периферической крови. Время созревания ретикулоцитов составляет 4-5 дня, из них в течение 3 дней они созревают в периферической крови, после чего становятся зрелыми эритроцитами. У новорожденных ретикулоциты обнаруживаются в большем количестве, чем у взрослых.

Число ретикулоцитов в крови отражает регенеративные свойства костного мозга. Их подсчет имеет значение для оценки степени активности эритропоэза (продукции эритроцитов): при ускорении эритропоэза доля ретикулоцитов возрастает, а при замедлении снижается. В случае усиленного разрушения эритроцитов доля ретикулоцитов может превышать 50%. Резкое снижение количества эритроцитов в периферической крови может привести к искусственному завышению числа ретикулоцитов, так как последний рассчитывается в % от всех эритроцитов. Поэтому для оценки тяжести анемий используют «ретикулярный индекс»: % ретикулоцитов х гематокрит / 45 х 1,85, где 45 – нормальный гематокрит, 1,85- количество суток, необходимых для поступления новых ретикулоцитов в кровь. Если индекс < 2 – говорит о гипопролиферативном компоненте анемии, если > 2-3, то происходит увеличение образования эритроцитов.

Показания к назначению анализа:

• диагностика неэффективного гемопоэза или снижения продукции эритроцитов;
• дифференциальная диагностика анемий;
• оценка реакции на терапию препаратами железа, фолиевой кислоты, витамина В12, эритропоэтином;
• мониторинг эффекта трансплантации костного мозга;
• мониторинг терапии эритросупрессорами.
• Подготовка к исследованию: исследование проводят натощак или как минимум через 2 часа после
• последнего приема пищи, при взятии крови необходимо избегать длительного сжатия вены жгутом.

Когда число ретикулоцитов увеличивается (ретикулоцитоз)?

• Постгеморрагичекая анемия (ретикулоцитарный криз, увеличение в 3-6 раз).
• Гемолитическая анемия (до 300%).
• Острый недостаток кислорода.
• Лечение В12-дефицитной анемии (ретикулоцитарный криз на 5 — 9 день терапии витамином В12).
• Терапия железодефицитных анемий препаратами железа (8 — 12 день лечения).
• Талассемия.
• Малярия.
• Полицитемия.
• Метастазы опухолей в костный мозг.

Когда число ретикулоцитов уменьшается?

• Апластическая анемия.
• Гипопластическая анемия.
• Нелеченная В12-дефицитная анемия.
• Метастазы новообразований в кости.
• Аутоиммунные заболевания системы кроветворения.
• Микседема.
• Заболевания почек.
• Алкоголизм.

Источник: gemohelp.ru